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chenlugb

木虫 (小有名气)

[交流] [求助]DNA提取的问题

我在DNA提取过程中,在加入酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)后离心总是出现混浊,离不下去,那位高手知道是怎么回事啊?

[ Last edited by telomerase on 2007-11-13 at 11:32 ]
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浪迹天涯

铜虫 (初入文坛)

可能是你的样品有其它杂质。
2楼2007-01-27 15:23:57
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eleenjane

金虫 (小有名气)

试剂的问题?
3楼2007-01-27 15:54:16
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无根萍

银虫 (小有名气)

请问你从什么材料中提取DNA? 这是因为不同材料含有的杂质不一样,因此才能给予你适当的解决办法。另外建议 你不凡把你的提取方案告诉大家,这样才有针对性的给予你的具体解决办法。
学术交流的联系方式: huangqingbeijing@yahoo.com.cn
4楼2007-01-27 16:08:53
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chenlugb

木虫 (小有名气)

我是用梨叶片做的,试剂没有问题,因为不是每个都出不来,是部分样品混浊,我用的CTAB提取法,方案就是先用液氮研磨叶片,加入预热的CTAB提取液2mL,混匀,65℃温浴30min,冷却至室温,5300rpm离心15min
5楼2007-01-27 19:09:36
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heda0691

金虫 (小有名气)


telomerase(金币+1,VIP+0):thanks!
我也碰到过这种情况,原因说不清。把转速提高些试试(10000-12000rpm,10min),好象有点效果。
坚果的事业贵在坚持
6楼2007-01-27 19:53:31
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suneternal

木虫 (小有名气)


telomerase(金币+1,VIP+0):谢谢分析!!
我觉得可能是中间乳化剂的问题,另外可能是温度比较低。
我也经常提出DNA,是从动物组织中。开始的时候也出过一些问题,但我尽量能把每一步做到标准化,现在是基本没出过问题了。
我觉得你加入样品多少(磨完后在加CTAB前称一下样品),加多少CTAB,再加多少酚氯仿,最好都有一个比例。这样做虽然有点繁琐,但我觉得中间出了问题也好知道在哪里。
你也可以象楼上说的,加大离心速度。
7楼2007-01-27 23:41:20
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chenlugb

木虫 (小有名气)

除了提高转数还有没有别的办法?偶实验室的离心机最大5300rpm
8楼2007-01-28 15:50:29
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yaoqian622


telomerase(金币+1,VIP+0):thanks!
在材料研磨时要注意材料量,尽量作到研磨成粉状,用1.5ml离心管装时液氮粉的量不要超过0.5ml的线,建议多次离心抽提,适量提高转速,但也不要过高。
9楼2007-01-29 00:23:29
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chenlugb

木虫 (小有名气)

谢谢各位!
10楼2007-01-29 13:45:16
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