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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]DNA提取的问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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chenlugb

木虫 (小有名气)

[交流] [求助]DNA提取的问题

我在DNA提取过程中，在加入酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）后离心总是出现混浊，离不下去，那位高手知道是怎么回事啊？

[ Last edited by telomerase on 2007-11-13 at 11:32 ]
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1楼 2007-01-27 13:53:52
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浪迹天涯

铜虫 (初入文坛)
可能是你的样品有其它杂质。
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2楼2007-01-27 15:23:57
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eleenjane

金虫 (小有名气)
试剂的问题？
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3楼2007-01-27 15:54:16
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无根萍

银虫 (小有名气)
请问你从什么材料中提取DNA? 这是因为不同材料含有的杂质不一样，因此才能给予你适当的解决办法。另外建议 你不凡把你的提取方案告诉大家，这样才有针对性的给予你的具体解决办法。
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学术交流的联系方式： huangqingbeijing@yahoo.com.cn
4楼2007-01-27 16:08:53
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chenlugb

木虫 (小有名气)
我是用梨叶片做的，试剂没有问题，因为不是每个都出不来，是部分样品混浊，我用的CTAB提取法，方案就是先用液氮研磨叶片，加入预热的CTAB提取液2mL，混匀，65℃温浴30min，冷却至室温，5300rpm离心15min
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5楼2007-01-27 19:09:36
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heda0691

金虫 (小有名气)
★
telomerase(金币+1,VIP+0):thanks！
我也碰到过这种情况，原因说不清。把转速提高些试试（10000-12000rpm，10min），好象有点效果。
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坚果的事业贵在坚持
6楼2007-01-27 19:53:31
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suneternal

木虫 (小有名气)
★
telomerase(金币+1,VIP+0):谢谢分析！！
我觉得可能是中间乳化剂的问题，另外可能是温度比较低。
我也经常提出DNA，是从动物组织中。开始的时候也出过一些问题，但我尽量能把每一步做到标准化，现在是基本没出过问题了。
我觉得你加入样品多少（磨完后在加CTAB前称一下样品），加多少CTAB，再加多少酚氯仿，最好都有一个比例。这样做虽然有点繁琐，但我觉得中间出了问题也好知道在哪里。
你也可以象楼上说的，加大离心速度。
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7楼2007-01-27 23:41:20
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chenlugb

木虫 (小有名气)
除了提高转数还有没有别的办法？偶实验室的离心机最大5300rpm
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8楼2007-01-28 15:50:29
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yaoqian622

★
telomerase(金币+1,VIP+0):thanks！
在材料研磨时要注意材料量，尽量作到研磨成粉状，用1.5ml离心管装时液氮粉的量不要超过0.5ml的线，建议多次离心抽提，适量提高转速，但也不要过高。
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9楼2007-01-29 00:23:29
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chenlugb

木虫 (小有名气)
谢谢各位！
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10楼2007-01-29 13:45:16
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