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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测酶活为什么要加巯基乙醇或DTT？
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denglei

新虫 (小有名气)

[求助] 测酶活为什么要加巯基乙醇或DTT？

他们的作用是什么？
由于都有毒性，有没有可以代替他们的试剂？
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1楼 2011-12-26 12:05:19
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3, BioEPI+1): 2011-12-26 17:39:24
那要看哪些酶吧，加入DTT、beta-巯基乙醇是为了维持活性酶带有-SH中心还原性质的。
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2楼2011-12-26 14:20:18
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denglei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by iaminxanadu at 2011-12-26 14:20:18:
那要看哪些酶吧，加入DTT、beta-巯基乙醇是为了维持活性酶带有-SH中心还原性质的。

谢谢回复。这两种物质都有毒性和难闻的气味。有什么替代者没有
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3楼2011-12-26 14:41:33
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助！ 2011-12-26 18:04:38
这个还没注意到

DTT毒性比较低的，想找更好的保护剂，不妨试试半胱氨酸不知道对你的酶活影响不？或者那些氧还电位低的东西试试吧~
我回头帮你查查看~
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4楼2011-12-26 15:28:20
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
Vc、谷胱甘肽。。。。这些都需要实验来测试。

我想你也是用一下，有时间再做吧~
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5楼2011-12-26 15:30:55
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
TCEP.HCl
这个呢？
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denglei
6楼2011-12-26 15:36:27
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yhsun8033

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare(金币+5): 鼓励新虫发帖交流 2011-12-26 17:39:44
巯基乙醇或DTT都是还原剂，能够防止二硫键之间的交联。一些酶的活性中心有-SH，维持它的活性状态对酶的活性是必需的。还有一种情况是蛋白分子之间也有可能发生二硫键的交联，影响蛋白结构，进而影响活性。所以一般在酶的测活体系中要加入巯基乙醇或DTT。一般来说，DTT用的多一些（味道小一些，还原能力也够用的）。这两个的毒性都不大，在酶活测定中非常常用。如果没有特殊情况，不需要找替代品。
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7楼2011-12-26 16:41:49
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denglei

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by iaminxanadu at 2011-12-26 15:36:27:
TCEP.HCl
这个呢？

非常感谢您的认真回复！！
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8楼2011-12-27 09:08:42
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liqian86615

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以加EDTA，我也是做酶的固定的，如果是为了维持活性酶带有-SH中心还原性质的话。
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9楼2011-12-27 09:38:40
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microz

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yhsun8033 at 2011-12-26 16:41:49
巯基乙醇或DTT都是还原剂，能够防止二硫键之间的交联。一些酶的活性中心有-SH，维持它的活性状态对酶的活性是必需的。还有一种情况是蛋白分子之间也有可能发生二硫键的交联，影响蛋白结构，进而影响活性。所以一般在 ...

如果酶不带有二硫键，是不是就可以不加DTT了
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10楼2018-03-30 12:46:31
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