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stone0989

银虫 (初入文坛)


[交流] 发酵液中蛋白质的提取

发酵液离心后取上清液,冷冻干燥浓缩后重新溶于蒸馏水中,进行双向电泳,结果达不到水化过程第一步50V电压,人家解释说是样品太杂,需要去盐处理。不知道有没有遇过这种情况的,怎么解决?除了透析,还有其他去盐方法吗?我看大家有的用0.22微米的超滤管,能起到去盐作用吗?
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jialemon

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by zhouyunbo at 2012-08-10 09:57:38
缓冲体系都是有盐的,乙酸钠也是一种盐。我们所谓的脱盐是指的NaCl或硫酸铵盐,他们含量都是大于200mM。而缓冲体系里的乙酸和乙酸钠浓度一般是小于50mM的,可以不除此盐,此盐非彼盐!...

啊,原来是这样啊,我的培养基中的硫酸铵浓度是10g/l 摩尔浓度也就是74mM,浓度不算高吧?发酵上清可以不除盐直接做二维电泳吗?
11楼2012-08-11 14:44:43
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gene001

金虫 (正式写手)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-12-14 19:58:01
stone0989(金币+1): 2011-12-14 23:09:13
分子筛也可以脱盐的吧,上个简单的凝胶过滤柱!
2楼2011-12-14 19:38:50
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daodao8657

金虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
stone0989(金币+2): 2011-12-14 23:11:27
用凝胶柱脱盐会让样品有一定程度的稀释,如果对样品浓度有要求或者样品体积较大的话,用凝胶柱反而不方便
用超滤管能起到置换缓冲液脱盐的目的,但是比较适合于样品浓度较低的情况,这种浓缩过重新溶于蒸馏水的情况往往蛋白浓度很高,超滤管不一定好用
3楼2011-12-14 21:32:01
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stone0989

银虫 (初入文坛)


引用回帖:
: Originally posted by daodao8657 at 2011-12-14 21:32:01:
用凝胶柱脱盐会让样品有一定程度的稀释,如果对样品浓度有要求或者样品体积较大的话,用凝胶柱反而不方便
用超滤管能起到置换缓冲液脱盐的目的,但是比较适合于样品浓度较低的情况,这种浓缩过重新溶于蒸馏水的情 ...

那可不可以先去盐 再浓缩?发酵液离心后,上清液先过超滤管,在浓缩?
4楼2011-12-14 23:11:16
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