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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 发酵液中蛋白质的提取
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stone0989

银虫 (初入文坛)

[交流] 发酵液中蛋白质的提取

发酵液离心后取上清液，冷冻干燥浓缩后重新溶于蒸馏水中，进行双向电泳，结果达不到水化过程第一步50V电压，人家解释说是样品太杂，需要去盐处理。不知道有没有遇过这种情况的，怎么解决？除了透析，还有其他去盐方法吗？我看大家有的用0.22微米的超滤管，能起到去盐作用吗？
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1楼 2011-12-14 16:09:04
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zhouyunbo

铁虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by jialemon at 2012-08-09 21:45:05
你好，我想问下无盐的缓冲液都有什么啊，缓冲液基本上都是有盐的呀？我要用pH4的，乙酸和乙酸钠缓冲体系可以吗...

缓冲体系都是有盐的，乙酸钠也是一种盐。我们所谓的脱盐是指的NaCl或硫酸铵盐，他们含量都是大于200mM。而缓冲体系里的乙酸和乙酸钠浓度一般是小于50mM的，可以不除此盐，此盐非彼盐!
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10楼2012-08-10 09:57:38
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gene001

金虫 (正式写手)
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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-12-14 19:58:01
stone0989(金币+1): 2011-12-14 23:09:13
分子筛也可以脱盐的吧，上个简单的凝胶过滤柱！
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2楼2011-12-14 19:38:50
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daodao8657

金虫 (小有名气)
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stone0989(金币+2): 2011-12-14 23:11:27
用凝胶柱脱盐会让样品有一定程度的稀释，如果对样品浓度有要求或者样品体积较大的话，用凝胶柱反而不方便
用超滤管能起到置换缓冲液脱盐的目的，但是比较适合于样品浓度较低的情况，这种浓缩过重新溶于蒸馏水的情况往往蛋白浓度很高，超滤管不一定好用
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3楼2011-12-14 21:32:01
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stone0989

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by daodao8657 at 2011-12-14 21:32:01:
用凝胶柱脱盐会让样品有一定程度的稀释，如果对样品浓度有要求或者样品体积较大的话，用凝胶柱反而不方便
用超滤管能起到置换缓冲液脱盐的目的，但是比较适合于样品浓度较低的情况，这种浓缩过重新溶于蒸馏水的情 ...

那可不可以先去盐 再浓缩？发酵液离心后，上清液先过超滤管，在浓缩？
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4楼2011-12-14 23:11:16
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daodao8657

金虫 (小有名气)
★
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stone0989(金币+1): 2011-12-15 21:27:40
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone0989 at 2011-12-14 23:11:16:
那可不可以先去盐 再浓缩？发酵液离心后，上清液先过超滤管，在浓缩？

可以尝试下，不过超滤管的压力会很大，可能会堵
我们是用millipo的超滤仪，浓缩脱盐可以一步完成
其实可以考虑下先脱盐再冻干浓缩的，这样比较符合一般的实验思路
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5楼2011-12-15 11:02:11
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stone0989

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by daodao8657 at 2011-12-15 11:02:11:
可以尝试下，不过超滤管的压力会很大，可能会堵
我们是用millipo的超滤仪，浓缩脱盐可以一步完成
其实可以考虑下先脱盐再冻干浓缩的，这样比较符合一般的实验思路

好 谢谢 我试试
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7楼2011-12-15 21:28:03
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)
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0.22微米的超滤管，能起到去盐作用,但要加入无盐的缓冲液，替换你原来有盐的缓冲液，同时起到浓缩的作用，有利于你后面的冷冻干燥；也可以用分子筛脱盐，但会稀释样品，
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8楼2012-01-11 10:50:58
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jialemon

新虫 (初入文坛)
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8楼: Originally posted by dasheng1980 at 2012-01-11 10:50:58
0.22微米的超滤管，能起到去盐作用,但要加入无盐的缓冲液，替换你原来有盐的缓冲液，同时起到浓缩的作用，有利于你后面的冷冻干燥；也可以用分子筛脱盐，但会稀释样品，

你好，我想问下无盐的缓冲液都有什么啊，缓冲液基本上都是有盐的呀？我要用pH4的，乙酸和乙酸钠缓冲体系可以吗
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9楼2012-08-09 21:45:05
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jialemon

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by zhouyunbo at 2012-08-10 09:57:38
缓冲体系都是有盐的，乙酸钠也是一种盐。我们所谓的脱盐是指的NaCl或硫酸铵盐，他们含量都是大于200mM。而缓冲体系里的乙酸和乙酸钠浓度一般是小于50mM的，可以不除此盐，此盐非彼盐!...

啊，原来是这样啊，我的培养基中的硫酸铵浓度是10g/l 摩尔浓度也就是74mM，浓度不算高吧？发酵上清可以不除盐直接做二维电泳吗？
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11楼2012-08-11 14:44:43
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caohuawei

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
您做的是什么产品的发酵？
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12楼2014-03-03 22:00:21
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阳光香味6楼
2011-12-15 11:22   回复  
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