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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 发酵液中蛋白质的提取
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stone0989

银虫 (初入文坛)

[交流] 发酵液中蛋白质的提取

发酵液离心后取上清液，冷冻干燥浓缩后重新溶于蒸馏水中，进行双向电泳，结果达不到水化过程第一步50V电压，人家解释说是样品太杂，需要去盐处理。不知道有没有遇过这种情况的，怎么解决？除了透析，还有其他去盐方法吗？我看大家有的用0.22微米的超滤管，能起到去盐作用吗？
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1楼 2011-12-14 16:09:04
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stone0989

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by daodao8657 at 2011-12-14 21:32:01:
用凝胶柱脱盐会让样品有一定程度的稀释，如果对样品浓度有要求或者样品体积较大的话，用凝胶柱反而不方便
用超滤管能起到置换缓冲液脱盐的目的，但是比较适合于样品浓度较低的情况，这种浓缩过重新溶于蒸馏水的情 ...

那可不可以先去盐 再浓缩？发酵液离心后，上清液先过超滤管，在浓缩？
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4楼2011-12-14 23:11:16
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gene001

金虫 (正式写手)
★ ★
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amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-12-14 19:58:01
stone0989(金币+1): 2011-12-14 23:09:13
分子筛也可以脱盐的吧，上个简单的凝胶过滤柱！
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2楼2011-12-14 19:38:50
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daodao8657

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
stone0989(金币+2): 2011-12-14 23:11:27
用凝胶柱脱盐会让样品有一定程度的稀释，如果对样品浓度有要求或者样品体积较大的话，用凝胶柱反而不方便
用超滤管能起到置换缓冲液脱盐的目的，但是比较适合于样品浓度较低的情况，这种浓缩过重新溶于蒸馏水的情况往往蛋白浓度很高，超滤管不一定好用
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3楼2011-12-14 21:32:01
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daodao8657

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
stone0989(金币+1): 2011-12-15 21:27:40
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone0989 at 2011-12-14 23:11:16:
那可不可以先去盐 再浓缩？发酵液离心后，上清液先过超滤管，在浓缩？

可以尝试下，不过超滤管的压力会很大，可能会堵
我们是用millipo的超滤仪，浓缩脱盐可以一步完成
其实可以考虑下先脱盐再冻干浓缩的，这样比较符合一般的实验思路
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5楼2011-12-15 11:02:11
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