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kzhchg2006

新虫 (小有名气)


[交流] 电镜扫描,微生物样品处理问题!请教大家!!

微生物样品处理
第一做电镜扫描,处理四膜虫的样品,没有临界点干燥仪,只有冷冻干燥仪。准备用叔丁醇,然后进行冷冻干燥,不知是不是可行,一般冷冻干燥需多长时间?还有制好样品后需要马上就进行镀膜、电镜吗,还是可以放一放???有点着急啊,希望能尽快得到大家的帮助、、谢啦
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happybenny

铁杆木虫 (正式写手)


★ ★
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zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-13 22:19:21
微生物处理就是用戊二醛固定,然后乙醇脱水的,没有临界干燥也没有太大关系,可能照出来的不是很好看,你固定脱水后,可以立即电镀,也可以放一两天应该没问题的,因为固定过后就没事了。
3楼2011-12-13 20:41:09
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494229644

木虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
要想拍出好的电镜图片,最好用2.5%戊二醛固定后,拿到电镜实验室让专门人员帮你处理,自己在实验室处理效果不好。
4楼2011-12-14 08:07:10
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wjf008

金虫 (正式写手)



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冻干为止,但是一定要一次冻干,所以时间久一点没问题,要是一次不干就毁了。而且冻干之前要-70℃预冻。其他如2楼所说。
5楼2011-12-14 14:49:38
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wansanlian

金虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by wjf008 at 2011-12-14 14:49:38:
冻干为止,但是一定要一次冻干,所以时间久一点没问题,要是一次不干就毁了。而且冻干之前要-70℃预冻。其他如2楼所说。

可是就算是一次冻干,先进行了预冷,我发现我们干燥出来的东西还是一样会变形呢?用的也是冷冻干燥仪~
6楼2012-03-30 09:41:10
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
参照我的细菌电镜办法。
不用固定,只是干燥一下就可以了。

1.最好是用那种无固体的水溶性培养基,例如LB,来培养。
这方便分离菌体。

2.离心,收集菌体,弃掉培养基,这个一定要的。
否则等液体蒸发了,会在基底上留上一层培养基的薄膜。

3.再用0.9% NaCl 或无菌水悬浮菌体,最终OD600=1-2吧,
不能太浓了,否则会一大堆,看不到单个菌体。
你可以做一系列浓度的,最后选择最好的那个图片就行。

4.加10-20uL 在载玻片上,充分铺开并室温风干或酒精灯烘干。
不要温度过高。
注意正反面。
(玻璃载玻片要干净,上面不要留有灰尘等。并提前切成10mm* 10mm,这个要放在扫描电镜提供的那个小架子上的,尺寸不能再大了。)

5.扫描当天做完上面的工作,就可以直接拿去了。
其他的工作人员会告诉你如何做。
7楼2012-03-30 12:15:34
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scorpiodju

银虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by HarveyWang at 2012-03-30 12:15:34
参照我的细菌电镜办法。
不用固定,只是干燥一下就可以了。

1.最好是用那种无固体的水溶性培养基,例如LB,来培养。
这方便分离菌体。

2.离心,收集菌体,弃掉培养基,这个一定要的。
否则等液体蒸发了,会 ...

你好,请问这个工作做完后多久之内必须做完?时间久了细胞形态会不会发生变化?谢谢!
8楼2012-12-10 11:48:38
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by scorpiodju at 2012-12-10 11:48:38
你好,请问这个工作做完后多久之内必须做完?时间久了细胞形态会不会发生变化?谢谢!...

再去看一遍这个帖子,做电镜之前一个小时,准备好。。。培养细菌,多么简单方便的事。。
9楼2012-12-10 16:56:11
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简单回复
2011-12-13 20:14   回复  
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