[交流] 电镜扫描，微生物样品处理问题！请教大家！！

微生物样品处理
第一做电镜扫描，处理四膜虫的样品，没有临界点干燥仪，只有冷冻干燥仪。准备用叔丁醇，然后进行冷冻干燥，不知是不是可行，一般冷冻干燥需多长时间？还有制好样品后需要马上就进行镀膜、电镜吗，还是可以放一放？？？有点着急啊，希望能尽快得到大家的帮助、、谢啦

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1楼 2011-12-13 15:25:46

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HarveyWang

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参照我的细菌电镜办法。
不用固定，只是干燥一下就可以了。

1.最好是用那种无固体的水溶性培养基，例如LB，来培养。
这方便分离菌体。

2.离心，收集菌体，弃掉培养基，这个一定要的。
否则等液体蒸发了，会在基底上留上一层培养基的薄膜。

3.再用0.9% NaCl 或无菌水悬浮菌体，最终OD600=1-2吧，
不能太浓了，否则会一大堆，看不到单个菌体。
你可以做一系列浓度的，最后选择最好的那个图片就行。

4.加10-20uL 在载玻片上，充分铺开并室温风干或酒精灯烘干。
不要温度过高。
注意正反面。
（玻璃载玻片要干净，上面不要留有灰尘等。并提前切成10mm* 10mm，这个要放在扫描电镜提供的那个小架子上的，尺寸不能再大了。）

5.扫描当天做完上面的工作，就可以直接拿去了。
其他的工作人员会告诉你如何做。