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kvvvk666888

铁杆木虫 (正式写手)

emuch首席科学家、木虫学者

应助: 1 (幼儿园)
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专业: 微生物生理与生物化学

[交流] 跪求几道分子题，有金币赠（10个），学分子的

1 如果有一PCR产物，如何克隆并鉴定分析之?
2 加入从植物中克隆到一功能未知基因的cDNA序列，试设计一实验证明该基因的生物学功能。
3 已知一段长度为 1.5Kb的cDNA序列和与之对应的长度为2.5Kb的基因组序列。如何对上述两个序列进行分析并确定该cDNA的编码区？同时设计一实验证明该cDNA是全长cDNA序列。

[ Last edited by kvvvk666888 on 2007-1-18 at 15:47 ]

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1楼 2007-01-18 15:16:41

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googleuc

应助: (幼儿园)
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虫号: 135020

★ ★
asr(金币+2):谢谢,辛苦了!:D

1 如果有一PCR产物，如何克隆并鉴定分析之?

1. Direct clone into TA vector, then sequence it.
for TA vector
http://www.invitrogen.com/content/sfs/manuals/topota_man.pdf

2 加入从植物中克隆到一功能未知基因的cDNA序列，试设计一实验证明该基因的生物学功能。

2. Southern blot and in situ hybridization show the genomic location, northern blot explores the expression pattern, GST or his tag express the protein in vitro -- to obtain protein for biochemical characterization. Protein function could also be predicated by homology search, such as blast for blast:
http://0-www.ncbi.nlm.nih.gov.library.vu.edu.au/BLAST/

3 已知一段长度为 1.5Kb的cDNA序列和与之对应的长度为2.5Kb的基因组序列。如 ...

3. By sequence comparison figure out the intron and exon structure, then northern blot to see the expressed gene's length, then 5RACE or 3 RACE. Blast search or protomor, ployA site identification from genomic sequence would be helpful too.

for 5RACE
http://www.nature.com/nmeth/journal/v2/n8/abs/nmeth0805-629.html
for 3 RACE
http://www.cmhd.ca/protocols/genetrap_pdf/3'RACE.pdf
http://biowww.net/detail-329.html

引用回帖:

Originally posted by kvvvk666888 at 2007-1-18 03:16 PM:
1 如果有一PCR产物，如何克隆并鉴定分析之?
2 加入从植物中克隆到一功能未知基因的cDNA序列，试设计一实验证明该基因的生物学功能。
3 已知一段长度为 1.5Kb的cDNA序列和与之对应的长度为2.5Kb的基因组序列。如 ...

[ Last edited by googleuc on 2007-1-20 at 12:41 ]