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kvvvk666888铁杆木虫 (正式写手)
emuch首席科学家、木虫学者
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1 如果有一PCR产物，如何克隆并鉴定分析之? 2 加入从植物中克隆到一功能未知基因的cDNA序列，试设计一实验证明该基因的生物学功能。 3 已知一段长度为 1.5Kb的cDNA序列和与之对应的长度为2.5Kb的基因组序列。如何对上述两个序列进行分析并确定该cDNA的编码区？同时设计一实验证明该cDNA是全长cDNA序列。 [ Last edited by kvvvk666888 on 2007-1-18 at 15:47 ] |
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1)用扩增的引物再做一次菌落PCR或菌液PCR,电泳检测阳性片段(;2)提取质粒DNA后用限制性内切酶把目的片段切下来,如T-EASY VECTOR的重组子可用EcoRI酶切,再电泳检测.
2楼2007-01-18 19:24:29
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3楼2007-01-18 19:26:45
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4楼2007-01-18 19:33:11
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asr(金币+2):谢谢,辛苦了!:D
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1 如果有一PCR产物，如何克隆并鉴定分析之? 1. Direct clone into TA vector, then sequence it. for TA vector http://www.invitrogen.com/content/sfs/manuals/topota_man.pdf 2 加入从植物中克隆到一功能未知基因的cDNA序列，试设计一实验证明该基因的生物学功能。 2. Southern blot and in situ hybridization show the genomic location, northern blot explores the expression pattern, GST or his tag express the protein in vitro -- to obtain protein for biochemical characterization. Protein function could also be predicated by homology search, such as blast for blast: http://0-www.ncbi.nlm.nih.gov.library.vu.edu.au/BLAST/ 3 已知一段长度为 1.5Kb的cDNA序列和与之对应的长度为2.5Kb的基因组序列。如 ... 3. By sequence comparison figure out the intron and exon structure, then northern blot to see the expressed gene's length, then 5RACE or 3 RACE. Blast search or protomor, ployA site identification from genomic sequence would be helpful too. for 5RACE http://www.nature.com/nmeth/journal/v2/n8/abs/nmeth0805-629.html for 3 RACE http://www.cmhd.ca/protocols/genetrap_pdf/3'RACE.pdf http://biowww.net/detail-329.html [ Last edited by googleuc on 2007-1-20 at 12:41 ] |
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