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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助 SSR实验技术
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xiaochangwen

银虫 (小有名气)

[求助] 求助 SSR实验技术

我做的是玉米SSR标记 同一批试剂 是在半年前买的，半年前做的时候效果很好 得到的普带也很清晰  可最近做却做不出来了，不知道是什么原因。

这个是半年前做的



这个是最近做的，左侧点的是mark  500 400 300 200 150 100 50bp
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1楼 2011-11-23 19:02:06
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xiaochangwen

银虫 (小有名气)
一般模板量是多少ng？ 我用的是20ul的体系
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3楼2011-11-23 22:10:00
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
主要还是PCR的问题，是不是模板浓度太大了？
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2011-11-23 21:21:53
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cindywang88

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

xiaochangwen(金币+1): 恩 我再试试 谢谢 2011-11-24 09:39:23
重提一下模板看看，不是模板就是引物降解了。
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4楼2011-11-24 08:43:22
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zaasyangyong

金虫 (正式写手)
我做的时候一般20-100ng，一开始还很严格，大量的做了其实也都没这么严格。但是我一般都会测浓度，不同样本调成同一浓度，至于量多点少点我觉得问题不大。
问题了，我看了你的图，我觉得应该不是染色的问题，应该是没产物。至于你的PCR哪里出问题了，我也不知道。首先关注模版和引物。重提2、3个新鲜叶片的DNA，新合成2、3对引物，和原来的2、3个模版，2、3对引物完全随机PCR对比，可能会找到原因。
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算了
5楼2011-11-24 10:30:21
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