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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关蛋白表达的问题
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zibeisha

木虫 (著名写手)

[求助] 有关蛋白表达的问题

我的目的基因片段只有200bp左右，现在连接到Pcdf-dute和pet-32a，每个都转到BL-21和Rosste中，诱导过后，sds-page检测，可是却不表达，诱导条件试过37度、25度、20度、18度和16度，IPTG浓度0.8mm、1mm和1.2mm，培养基试过LB、TB还有一个高浓度培养基，都没有表达，现在郁闷死了，无计可施了，各位大侠帮帮忙。
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有时我们无奈，有时我们迷茫，可是不管怎样，只要我们积极生活，命运就不会亏待我们。
1楼 2011-11-20 20:27:24
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CrystalDo

新虫 (初入文坛)
我现在也遇到了和楼主类似的问题，我是做单链抗体-酶的表达的，我把单链抗体-酶复合物的基因与PLIP6/GN载体连接，转到BL21感受态里表达，但表达出来的复合物表达量很低，酶活性很低，抗体也没有特异性，IPTG的浓度已做过优化了，试过用PEG浓缩，浓缩后酶的活性提高了，但抗体依然没有特异性，试过超声破碎，但还是没有效果，抗体依然没有特异性，想请教一下各位，还有没什么方法可以提高复合物的表达量啊？因为表达量那么低，也不能判断抗体的活性啊。。。。。我现在这种情况还有得救吗？请各位多多指教~
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19楼2011-11-23 10:28:58
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zibeisha

木虫 (著名写手)
自己先顶一下，希望懂行的人看到帮帮忙！
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有时我们无奈，有时我们迷茫，可是不管怎样，只要我们积极生活，命运就不会亏待我们。
2楼2011-11-20 21:16:06
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
zibeisha(金币+1): 这个载体没有试过。 2011-11-21 08:37:25
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-22 18:08:10
转速试过吗？不知道楼主实验室用过PGEX载体吗？
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jiayoubashaonian
3楼2011-11-20 21:32:12
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llglo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zibeisha(金币+1): 2011-11-21 08:40:57
西瓜(金币-3): 广告贴 2011-11-21 20:02:03
西瓜:编辑内容 2011-11-21 20:02
------------广告贴-------------

[ Last edited by 西瓜 on 2011-11-21 at 20:02 ]
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4楼2011-11-20 23:12:00
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