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林夕梦

木虫 (文坛精英)

珊瑚岛碧落堂主~~

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[求助] 3.7Kb片段基因与7Kb载体的质粒构建

如题，基因片段3.7Kb载体7Kb，Phage载体。
连接了几次都失败了。要么转化后没有长出克隆，要么长出来也是假阳性，小提质粒后酶切片段大小不对额

大片段不好连呢，求高手指教有妙招改进么？？

(转化采用的超级感受态细胞，42度30s)

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许多奇迹，我们相信，才会实现……

1楼 2011-11-17 14:21:26

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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge

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【答案】应助回帖

林夕梦(金币+3): 恩，O(∩_∩)O谢谢，非常感谢 2011-11-19 00:15:43

引用回帖:

29楼: Originally posted by 林夕梦 at 2011-11-18 17:27:18:
但是要用到not1了，酶切位点为8个碱基额，还要加保护位点，岂不是酶切效率会很低呢

如果你认为你选择的酶切位点会影响你的酶切效率，你完全可以选择其他的哈！限制酶的选择非常重要，尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶，如BamHI,HindIII,提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后，在各个酶的两边加上保护碱基，其原则可参照：