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未末

新虫 (初入文坛)

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虫号: 1270568
注册: 2011-04-19
专业: 药剂学

[求助] 请教siRNA转染的几个问题已有3人参与

各位战友好~~~~~我是一名研究生新生，悲催的要做siRNA，但是我们实验室又没有这方面经验和技术，于是只能自己摸索了。。有些菜鸟级的问题，还请各位专家高手不吝赐教！！！


   ①在做siRNA电泳和转染等等实验时，血清，培养液，胰酶等培养物质如何去除RNase？还是新开封的应该没有RNase呢，但是用了几次之后呢？
   ②siRNA很容易降解，那么可以对含siRNA的聚合物纳米粒做诸如粒径、透射电镜、紫外等等实验吗（目的是考察siRNA跟我们实验用聚合物复合成的纳米粒的性质）？
   ③siRNA 跟DNA的性质差别有多大？DNA的转染可否模拟siRNA?做转染实验可以先用eGFP,PGL-3之类的DNA报告基因来检测我的聚合物的转染效率吗？
   ④关于转染浓度。园子里的专家们说siRNA的作用浓度是10~100nM。但是我们从公司买来的总共才5nmol，就要近两千块了，这么用怎么吃得消啊。。。求助浓度用pmol级的可以吗？

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1楼 2011-11-10 13:35:21

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别踩我的菜

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 12998984
注册: 2018-11-28
专业: 细胞生物学

转染siRNA木有那么麻烦的，成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高。由于siRNA沉默时效性的影响，使用RFECT转染，转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测，转染后48-72小时才能进行蛋白检测。