[求助] 关于FRAP法测定抗氧化活性的实验细节已有2人参与

标准曲线测定的准备：   
称取27.8 mg本试剂盒提供的FeSO4•7H2O，溶解并定容到1 ml，此时浓度即为100 mM。取适量100 mM FeSO4溶液稀释至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM。通常可以使用蒸馏水或样品配制溶液配制标准品。
   FeSO4溶液宜新鲜配制使用，100 mM FeSO4溶液容易氧化产生三价铁盐，使溶液的颜色从最初的淡绿色逐渐转变为浅黄色。如果发现溶液的颜色已经呈现明显的黄色，应该弃用该溶液，并使用试剂盒提供的FeSO4•7H2O重新配制新鲜的FeSO4溶液。
总抗氧化能力的测定：  
(1) 96孔板的每个检测孔中加入180微升FRAP工作液。   (2) 空白对照孔中加入5微升蒸馏水或PBS等适当溶液；标准曲线检测孔内加入5微升各种浓度的FeSO4标准溶液；样品检测孔内加入5微升各种样品或0.15-1.5mM的Trolox作为阳性对照，轻轻混匀。   (3) 37℃孵育3-5分钟后测定A593。如果测定A593有困难，也可以在585-605nm范围内进行测定。   (4) 根据标准曲线计算出样品的总抗氧化能力。