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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于FRAP法测定抗氧化活性的实验细节
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kaikaifeng

荣誉版主 (文坛精英)

学术纯属狗屁~

[求助] 关于FRAP法测定抗氧化活性的实验细节 已有2人参与

如下所示，所有实验相关的，越详细越好。。
尤其是实验注意事项，下面描述中没有提到的。。
比如37度孵化3-5分钟，到底是多久？配FRAP工作液是在什么条件下配？
等等等等问题，不要从网上抄啊，粗枝大叶的也不需要，谢谢。。
引用回帖:
标准曲线测定的准备：   
称取27.8 mg本试剂盒提供的FeSO4•7H2O，溶解并定容到1 ml，此时浓度即为100 mM。取适量100 mM FeSO4溶液稀释至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM。通常可以使用蒸馏水或样品配制溶液配制标准品。
   FeSO4溶液宜新鲜配制使用，100 mM FeSO4溶液容易氧化产生三价铁盐，使溶液的颜色从最初的淡绿色逐渐转变为浅黄色。如果发现溶液的颜色已经呈现明显的黄色，应该弃用该溶液，并使用试剂盒提供的FeSO4•7H2O重新配制新鲜的FeSO4溶液。
总抗氧化能力的测定：  
(1) 96孔板的每个检测孔中加入180微升FRAP工作液。   (2) 空白对照孔中加入5微升蒸馏水或PBS等适当溶液；标准曲线检测孔内加入5微升各种浓度的FeSO4标准溶液；样品检测孔内加入5微升各种样品或0.15-1.5mM的Trolox作为阳性对照，轻轻混匀。   (3) 37℃孵育3-5分钟后测定A593。如果测定A593有困难，也可以在585-605nm范围内进行测定。   (4) 根据标准曲线计算出样品的总抗氧化能力。
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不扯淡，不忽悠，不懂不要装懂；不折腾，不闹腾，睁眼不说瞎话；凭良心做人，以品德服人。
1楼 2011-11-04 20:35:27
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冬天的泡沫

新虫 (初入文坛)
同求FRAP工作液的具体配置
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4楼2013-11-26 20:31:23
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kaikaifeng

荣誉版主 (文坛精英)

学术纯属狗屁~
没有人知道啊？
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不扯淡，不忽悠，不懂不要装懂；不折腾，不闹腾，睁眼不说瞎话；凭良心做人，以品德服人。
2楼2011-11-09 09:39:07
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nanayin

金虫 (正式写手)
同求

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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天很蓝阳光很好
3楼2013-08-24 09:00:15
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张苗苗

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

(1) FRAP法测定总抗氧化活性

分别配制p H值3.6的300 mmol/L 醋酸钠缓冲液，10 mmol/L TPTZ 溶液(溶解在40 mmol/L盐酸中)和 20 mmol/L FeCl3溶液，并以
10:1:1(v:v:v)的比例混合配制成FRAP 试剂（现用现配)；取 5 μL 不同浓度样品或标准品溶液加入 96 孔板中，迅速加入FRAP试剂150 μL
。在 592 nm 下测定 0 min 和 4 min 时样品和标准品的吸光度值，每个样品平行测定三次，以  500 μmol/L Vc 溶液作为标准品，计算样品的 FRAP 值，实验结果按下式计算：
FRAP值  =  (0  -  4  min  ΔA592样品)  /(0  -  4  min  ΔA592标准品)×500  (μmol/L)
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5楼2018-01-02 15:40:00
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