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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 谈谈大家HPLC摸条件经验
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
qinhy: PhEPI+1, 不错的总结~ 2012-03-29 08:35:05
1、如果能有相关的文献或资料参考，估计会相对比较简单。
2、条件摸索
a、样品性质
主要了解化合物的结构、分子量、pKa、UV、样品浓度范围、溶解度等。
b、色谱柱选择
样品能溶于水-有机混合液的大多数样品（特别是中性或非离子化合物），可以选择反相HPLC，流动相选择水-有机溶剂，色谱柱可以选择C18、C8、TMS、苯基、氰基。一般C18用得比较多。
样品为离子或可电离的化合物（特别是碱性或阳离子样品），可以选择离子对HPLC，流动相选择水-有机溶剂，控制pH的缓冲液和离子对试剂，色谱柱可选择C18、C8、氰基。一般C18用得比较多。
若反相或离子对HPLC无效时，或样品不溶于水-有机混合液。可以选择正相HPLC体系。流动相选择有机溶剂混合液，色谱柱选择氰基、氨基、硅胶、二醇基。
c、初始分离条件（相对较好的首要选择、等度）
色谱柱：150X4.6mm、5um、固定相为C18或C8
流动相：缓冲液-乙腈，缓冲液可选择纯水或缓冲盐（浓度10~30mM）（若中性样品，无需使用缓冲盐）并用酸碱调控pH（如果pH小于2.5，建议选择pH稳定的色谱柱，避免固定相流失），乙腈起始比例可以选择80~100%。
离子对等添加剂，开始时请不要使用。流速1.0~2.0ml/min，柱温35~40℃。
样品：（最好以流动相溶解样品）进样体积小于25uL，进样量小于100ug。
d、液相方法基本目标
分离度：R大于1.5
分离时间：5~10min较理想
定量：RSD小于2%
压力：基本要求小于200bar（20M）
针对基本目标，按实际情况进行调整，譬如流动相实际组分比例，缓冲盐浓度及pH，柱温，梯度等。
赞一下(3人) 回复此楼
守候在风中的宁静。
9楼2012-03-24 13:08:06
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