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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮我看看这个溶解qPCR曲线
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7788945

银虫 (小有名气)

[交流] 帮我看看这个溶解qPCR曲线

做了几组定量，得到了如下的溶解曲线。
其中“问题青年”是让我上火的图，“对照1”用的同“问题青年”一样的引物，“对照2”用的同“问题青年”一样的模板

对照1



对照2



问题青年

[ Last edited by 1949stone on 2011-10-31 at 21:52 ]
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1楼 2011-10-31 17:09:47
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7788945

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cloverplm at 2011-10-31 20:29:24:
从图上看，“问题青年”有非特异性扩增，溶解曲线的峰图太杂，可不可以用循环数为横坐标作个图，看这几个图形的峰值起峰点是否一致，“问题青年”的实验可以多做几次比较下。

起峰点不一样，“问题青年”起峰很晚，到了30cycles以后才起峰，做了40cycles，反应完的时候还没到平台期呢，所以重做是必须的了，两个对照一个是20左右，另一个是25左右
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7楼2011-10-31 22:21:43
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云霆子

金虫 (小有名气)
★
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7788945(金币+1): 2011-10-31 20:15:56
你有没有把你qPCR的产物跑个电泳？我怀疑“问题青年”有非特异扩增，而且扩增效率不高，引物和模板是不是不匹配？
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2楼2011-10-31 18:42:10
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7788945

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 云霆子 at 2011-10-31 18:42:10:
你有没有把你qPCR的产物跑个电泳？我怀疑“问题青年”有非特异扩增，而且扩增效率不高，引物和模板是不是不匹配？

跑了一下，的确有非特异性扩增，这个引物和模板之前是做过好几次的，跑普通的PCR，只是有二聚体而已，但是这个定量跑完了竟然出了涂抹带
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3楼2011-10-31 19:59:20
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云霆子

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
7788945(金币+1): 2011-10-31 22:15:07
引用回帖:
3楼: Originally posted by 7788945 at 2011-10-31 19:59:20:
跑了一下，的确有非特异性扩增，这个引物和模板之前是做过好几次的，跑普通的PCR，只是有二聚体而已，但是这个定量跑完了竟然出了涂抹带

那你做普通的PCR与qPCR用的条件相同么？比如退火温度。
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4楼2011-10-31 20:19:02
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