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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达蛋白诱导不出来
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mascotte

金虫 (正式写手)
yalan_p: 回帖置顶 多谢指教，本人不是生物学背景，蛋白的东西都不是很懂。以后还望多指教！我去查查相关信息和资料 2011-10-28 15:51:23
原核表达有时候的确不容易做。有时候表达的蛋白含有细菌不常用的密码子，例如Arg(AGG,AGA,CGA) Leu(CTA) ILe(ATA) Pro(CCC).如果你的稀有密码子比例不是很大 可以用Rosetta菌株试试 它补充了一定的大肠杆菌稀有密码子；
表达的蛋白如果有细胞毒性，会造成宿主的死亡，这种情况需要在细菌浓度比较大的时候进行诱导，诱导剂浓度大一些，时间短一些。
如果表达的蛋白有疏水的跨膜结构域，表达的难度就更大一些，一般采用低温长时间诱导，诱导剂一般浓度较低。
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11楼2011-10-28 08:53:52
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
引用回帖:
9楼: Originally posted by yalan_p at 2011-10-28 00:09:10:
另外，我现在用的是BL21，换宿主的话换什么呢？

自己网上去找，都研究生了使用google应该不是问题吧，google里面介绍稀有密码子的帖子多的是。


可以换Rosetta 2， Origami系列的宿主。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
12楼2011-10-28 15:24:49
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geshujuan

银虫 (小有名气)
和诱导条件有关，特别是加IPTG时菌体的浓度，我做的蛋白菌体浓的时候就诱导不出来蛋白！！
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我一定可以做的更好！！
13楼2012-06-29 09:44:07
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狄志欣dzx

新虫 (初入文坛)
我现在也在做表达，表达载体是PGEX-3X,表达菌株是DE3，时间诱导我做出来，有蛋白质表达。可是换做不同的OD值，就诱导不出来了，是什么原因？？
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14楼2013-09-18 10:25:38
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狄志欣dzx

新虫 (初入文坛)
一般在构建质粒时可以根据密码子的偏好性做一定的改变。我们实验室的师姐设计基因时根据氨基酸序列反转录出DNA，只不过要改一下密码子，这就要根据表达菌种改变。
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15楼2013-09-18 10:30:11
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ft610313217

新虫 (初入文坛)
我现在也遇到类似的问题，我用的是pGEX-4T-2，交给公司构建的质粒，拿回来直接诱导表达，表达不出蛋白，请问你最后是怎么解决的，期待回复
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16楼2015-07-18 09:10:08
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小小细胞啊

新虫 (小有名气)
我跟你情况一样  pGEX-4T 表达的融合蛋白50KDa，跑胶出来相应的位子蛋白没有明显的变化，反倒是大概56KDa的位子处诱导有明显变化，开始怀疑可能是有部分修饰或者由于某些原因蛋白理论值和SDS-PAGE胶图现实的大小不太一样，结果用WB验证了，杂不出来，有很多其他位子的细带。现在刚提了质粒送测序，希望能找到原因。请问你有pGEX-4T的载体序列码？能否发我？谢谢
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17楼2016-01-14 19:39:55
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