应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达蛋白诱导不出来
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 3499  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yalan_p

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达蛋白诱导不出来

最近用pGEX-4T-1构建了一个融合蛋白的表达载体，测序结果显示没有出现碱基的位移和变异，但是做诱导的时候却一直没有目的蛋白，我的蛋白在23kD左右，GST标签为26kD，诱导后在50kD左右应有比较亮的条带，但是SDS电泳显示30摄氏度诱导4h后的蛋白表达与对照是一样的。上清和沉淀都分别做了电泳，都是一样的结果。
    请教高手，这种情况我该怎么办？可能是什么原因？该如何进一步优化条件？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-10-26 18:17:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
引用回帖:
9楼: Originally posted by yalan_p at 2011-10-28 00:09:10:
另外，我现在用的是BL21，换宿主的话换什么呢？

自己网上去找，都研究生了使用google应该不是问题吧，google里面介绍稀有密码子的帖子多的是。


可以换Rosetta 2， Origami系列的宿主。
赞一下 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
12楼2011-10-28 15:24:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

yalan_p(金币+1): 唉，基本原理我也明白，现在已经做过了IPTG0.1mmol到1mmol，时间从3到5小时，就是诱导温度还没有改，之前一直是30度诱导 2011-10-26 21:55:17
不同的诱导时间点，
不同的诱导剂量，
不同的诱导温度
赞一下 回复此楼
2楼2011-10-26 20:19:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
adslye(金币+2): 很好的建议！鼓励交流~~ 2011-10-27 09:26:31
我估计换16度和25度也不会有什么表达。

分析下是不是有稀有密码子，换宿主吧。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2011-10-27 00:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by yalan_p at 2011-10-26 18:17:26:
最近用pGEX-4T-1构建了一个融合蛋白的表达载体，测序结果显示没有出现碱基的位移和变异，但是做诱导的时候却一直没有目的蛋白，我的蛋白在23kD左右，GST标签为26kD，诱导后在50kD左右应有比较亮的条带，但是SDS电 ...

更换载体或者宿主
赞一下 回复此楼
4楼2011-10-27 09:05:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！ +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-28 16:47 by jiyingjie123
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 085600 286分 材料求调剂 +7 麻辣鱿鱼 2026-03-27 8/400 2026-03-28 12:17 by zllcz
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +8 辰沐5211314 2026-03-26 8/400 2026-03-28 11:25 by xuxiang
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 303求调剂 +7 安忆灵 2026-03-22 8/400 2026-03-27 11:46 by sanrepian
[考研] 材料学硕，求调剂 6+5 糖葫芦888ll 2026-03-22 10/500 2026-03-27 08:18 by hypershenger
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 生物学 296 求调剂 +4 朵朵- 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:01 by 不吃魚的貓
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 315分，诚求调剂，材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭