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原核表达蛋白诱导不出来
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最近用pGEX-4T-1构建了一个融合蛋白的表达载体，测序结果显示没有出现碱基的位移和变异，但是做诱导的时候却一直没有目的蛋白，我的蛋白在23kD左右，GST标签为26kD，诱导后在50kD左右应有比较亮的条带，但是SDS电泳显示30摄氏度诱导4h后的蛋白表达与对照是一样的。上清和沉淀都分别做了电泳，都是一样的结果。 请教高手，这种情况我该怎么办？可能是什么原因？该如何进一步优化条件？ |
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yalan_p: 回帖置顶 多谢指教，本人不是生物学背景，蛋白的东西都不是很懂。以后还望多指教！我去查查相关信息和资料 2011-10-28 15:51:23
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原核表达有时候的确不容易做。有时候表达的蛋白含有细菌不常用的密码子，例如Arg(AGG,AGA,CGA) Leu(CTA) ILe(ATA) Pro(CCC).如果你的稀有密码子比例不是很大 可以用Rosetta菌株试试 它补充了一定的大肠杆菌稀有密码子； 表达的蛋白如果有细胞毒性，会造成宿主的死亡，这种情况需要在细菌浓度比较大的时候进行诱导，诱导剂浓度大一些，时间短一些。 如果表达的蛋白有疏水的跨膜结构域，表达的难度就更大一些，一般采用低温长时间诱导，诱导剂一般浓度较低。 |
11楼2011-10-28 08:53:52
yang0071
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4楼2011-10-27 09:05:05