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shenxing325

铜虫 (小有名气)

[求助] 貌似卫星菌落,为什么摇菌要不起来?

之前做的转化,平板式氨苄抗性,由于看上去一个克隆都没长,于是没有理它,多放了一天。结果后来意外的发现在角落里有一个很大的克隆,还有几颗围绕在它周围貌似卫星菌落的小克隆。由于那个大的单克隆长的实在太大了,所以只挑了那几个小个的去做了菌落PCR,结果目的条带非常亮,不太可能是假阳性,所以排除了是空菌的卫星菌落这个可能性。但是用氨苄去摇菌的时候,就摇不起来,请各位帮我分析下是怎么回事?另外,如果单克隆长的很大了,可以挑一点来接着做吗?会不会有杂菌?
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

shenxing325(金币+5): 谢谢,只有你一个人回答了我的问题呢 2011-10-28 16:37:14
氨苄的抗性在37度可以维持16小时左右,时间太长久会失效,之后杂菌以及不带质粒的菌就会长起来。你多放了一天才长起来,基本上可以认为是失败了,建议重做。
大的那个克隆,说不定还有可能,小的那些,看样子就是卫星菌落了。至于PCR能做出来,可能是转化的时候残余的质粒模板。氨苄摇不起来就说明它们不带质粒,我认为是卫星菌落。
大的那个菌也别做了,重新做转化吧。
2楼2011-10-25 17:25:18
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