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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 貌似卫星菌落，为什么摇菌要不起来？
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shenxing325

铜虫 (小有名气)

[求助] 貌似卫星菌落，为什么摇菌要不起来？

之前做的转化，平板式氨苄抗性，由于看上去一个克隆都没长，于是没有理它，多放了一天。结果后来意外的发现在角落里有一个很大的克隆，还有几颗围绕在它周围貌似卫星菌落的小克隆。由于那个大的单克隆长的实在太大了，所以只挑了那几个小个的去做了菌落PCR，结果目的条带非常亮，不太可能是假阳性，所以排除了是空菌的卫星菌落这个可能性。但是用氨苄去摇菌的时候，就摇不起来，请各位帮我分析下是怎么回事？另外，如果单克隆长的很大了，可以挑一点来接着做吗？会不会有杂菌？
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1楼2011-10-25 11:38:27
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

shenxing325(金币+5): 谢谢，只有你一个人回答了我的问题呢 2011-10-28 16:37:14
氨苄的抗性在37度可以维持16小时左右，时间太长久会失效，之后杂菌以及不带质粒的菌就会长起来。你多放了一天才长起来，基本上可以认为是失败了，建议重做。
大的那个克隆，说不定还有可能，小的那些，看样子就是卫星菌落了。至于PCR能做出来，可能是转化的时候残余的质粒模板。氨苄摇不起来就说明它们不带质粒，我认为是卫星菌落。
大的那个菌也别做了，重新做转化吧。
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2楼2011-10-25 17:25:18
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