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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 融合基因，选什么样的酶？
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junxiao0320

金虫 (小有名气)

[交流] 融合基因，选什么样的酶？

同学说用TAP酶，为什么不用高保真酶呢？如果可以，选那种高保真酶比较好？
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1楼 2011-10-23 08:27:34
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zc10052157

新虫 (正式写手)
★ ★
junxiao0320(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-25 10:46:30
PFU
LA tap

pryobest
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2楼2011-10-23 10:11:06
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junxiao0320

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-10-23 10:11:06:
PFU
LA tap

pryobest

这个意思是可以用高保真的，？
LA  Tap保真性怎么样？ pryobest 没有见过，那个公司的？

[ Last edited by junxiao0320 on 2011-10-23 at 10:41 ]
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3楼2011-10-23 10:40:02
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zc10052157

新虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流！ 2011-10-23 19:16:56
引用回帖:
3楼: Originally posted by junxiao0320 at 2011-10-23 10:40:02:
这个意思是可以用高保真的，？
LA  Tap保真性怎么样？ pryobest 没有见过，那个公司的？
[ Last edited by junxiao0320 on 2011-10-23 at 10:41 ]

保真都很好啊  我常用天根的PFU

takara的LA 适用于长链   
pryobest应该是更长的   可以P整个质粒那么长

你片段要是1KB以下   普通的TAP酶也好用的
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4楼2011-10-23 12:07:19
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junxiao0320

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-10-23 12:07:19:
保真都很好啊  我常用天根的PFU

takara的LA 适用于长链   
pryobest应该是更长的   可以P整个质粒那么长

你片段要是1KB以下   普通的TAP酶也好用的

我现在扩的不算长，一个100，一个340bp
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5楼2011-10-23 16:03:41
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zc10052157

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by junxiao0320 at 2011-10-23 16:03:41:
我现在扩的不算长，一个100，一个340bp

那应该没什么问题呀   普通酶就便宜些   你想保险可以用保真酶  

不过注意PFU的PCR片段是不能直接连接T载体的
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6楼2011-10-23 16:12:38
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junxiao0320

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-10-23 16:12:38:
那应该没什么问题呀   普通酶就便宜些   你想保险可以用保真酶  

不过注意PFU的PCR片段是不能直接连接T载体的

我买啦一个酶感觉，买错啦，不知他到底怎么回事，您帮我看看.非常感谢！
PrimeSTAR DNA Polimerase
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7楼2011-10-24 14:40:18
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zc10052157

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by junxiao0320 at 2011-10-24 14:40:18:
我买啦一个酶感觉，买错啦，不知他到底怎么回事，您帮我看看.非常感谢！
PrimeSTAR DNA Polimerase

怎么叫买错了   有啥问题
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8楼2011-10-24 16:49:48
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junxiao0320

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-10-24 16:49:48:
怎么叫买错了   有啥问题

说明书上说:
使用本制品扩增得到的PCR产物几乎都为平滑末端，经磷酸化后可直接克隆于具有平滑末端的载体中。
我用它扩出来的片段要经磷酸化，不是本来dNTP都有5‘磷酸吗？
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10楼2011-10-24 21:45:48
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zc10052157

新虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by junxiao0320 at 2011-10-24 21:45:48:
说明书上说:
使用本制品扩增得到的PCR产物几乎都为平滑末端，经磷酸化后可直接克隆于具有平滑末端的载体中。
我用它扩出来的片段要经磷酸化，不是本来dNTP都有5‘磷酸吗？

要看你PCR出来的片段下一步是做什么用的
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11楼2011-10-25 09:06:08
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zc10052157

新虫 (正式写手)
如果带着酶切位点就可以直接酶切连上质粒
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12楼2011-10-25 09:12:22
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junxiao0320

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zc10052157 at 2011-10-25 09:12:22:
如果带着酶切位点就可以直接酶切连上质粒

要先连到T载体上测序呀
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13楼2011-10-25 16:48:28
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zc10052157

新虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 可以后面再加A把 2011-10-25 17:53:03
引用回帖:
13楼: Originally posted by junxiao0320 at 2011-10-25 16:48:28:
要先连到T载体上测序呀

那你要换酶了  平末端不能连T载体
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14楼2011-10-25 17:26:46
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wxq9999楼
2011-10-24 16:54   回复  
junxiao0320(金币+1):谢谢参与
西瓜:编辑内容 2011-10-25 02:33
`` [ Last edited by 西瓜 on 2011-10-25 at 02:33 ]
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