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叶片中的激素提取不出来
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Sample Text 我现在用下面的方法来提取草的叶片中的IAA，然后再用高效液相色谱测量，可是提取不出来，不知道有没有人用过这种方法，希望能指点我一下，不胜感激；或者有更好的方法。谢谢 （1）取0.5g叶片，加液氮研磨至粉碎，然后加入8ml（0.05M，PH=7.0，含0.02%二乙基二硫带氨基甲酸钠）磷酸钠缓冲液，继续研磨至匀浆，倒入离心管中， （2） 在4。C条件下持续振荡1~2h。 （3） 取出离心管，用1M盐酸调PH约2.6 （4） 加入0.5g XAD-7离子交换树脂，在4。C条件下振荡半小时。 |
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 激素测定 |
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【答案】应助回帖
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缺友情(金币+2): 鼓励应助交流！欢迎常来农林版！ 2011-10-22 17:54:14
szslg(金币+5): 2011-11-10 16:59:38
缺友情(农林EPI+1): 优秀应助，授予EPI，欢迎常来农林版！ 2011-11-12 10:39:46
孙启亮: 回帖置顶 2011-12-22 10:01:32
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孙启亮: 回帖置顶 2011-12-22 10:01:32
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方法：80%甲醇低温研磨匀浆，1 OOOr/min离心30min ,取上清液，通过C18柱以去除植物色素。初纯化液用N2吹干、去除甲醇，加磷酸氢二钾HB. 0)溶解后，用乙酸乙酷萃取，水相(pH调至2. 5 )再用乙醇乙酷萃取(DHZRs与iPAs用正丁醇提取;ABA还需进行甲醋化)。N2吹干后加磷酸缓冲液溶解，用ELISA测定激素含量。 参见：周燮，植物激素IAA、GAs、CTKs与ABA的免疫检测技术，南京农业大学植物生理教研室编，1992 |
6楼2011-10-22 12:26:12
kukoob
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2楼2011-10-20 13:45:13
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kukoob
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4楼2011-10-20 13:59:22
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Leaf tissue (20 mg) was ground with a mortar and a pestle in liquid N, and homogenized in 1.5 mL Na-phosphate buffer (0.05 M, pH 7.0) containing 0.02% (w/v) sodium diethyldithiocarbamate as an antioxidant. An internal standard of 13C6–IAA (200 ng) was added into each sample and extracted by continuous shaking for 1 h at 4°C. The samples were transferred into 1.5-mL microcentrifuge tubes after extraction and pH was adjusted to approximately 2.6 with 1.0 M HCl (about 43 μL of HCl was required for 1 mL of extract). The sample was slurried with 60 mg of Amberlite XAD-7 (Sigma, MO) for 30 min. After removal of the buff er, the XAD-7 was washed with 2 × 500 μL of 1% acetic acid before being slurried with 2 × 500 μL of dichloromethane for 2 × 30 min (Edlund et al., 1995). The combined dichloromethane fractions were reduced to dryness with nitrogen gas. Samples were methylated with ethereal diazomethane at room temperature according to Prinsen et al. (2000). 这是我们老师给我们的方法，他说可以，但是我就是测不出来~~郁闷啊，你说可能是咱们国产药品配制的缓冲液不准确的原因吗？ |
5楼2011-10-20 14:12:39
qixs2011
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