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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 农林综合 » 叶片中的激素提取不出来
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szslg

银虫 (初入文坛)

[求助] 叶片中的激素提取不出来

Sample Text
我现在用下面的方法来提取草的叶片中的IAA，然后再用高效液相色谱测量，可是提取不出来，不知道有没有人用过这种方法，希望能指点我一下，不胜感激；或者有更好的方法。谢谢  
（1）取0.5g叶片，加液氮研磨至粉碎，然后加入8ml（0.05M，PH=7.0，含0.02%二乙基二硫带氨基甲酸钠）磷酸钠缓冲液，继续研磨至匀浆，倒入离心管中，

（2） 在4。C条件下持续振荡1~2h。

（3） 取出离心管，用1M盐酸调PH约2.6

（4） 加入0.5g XAD-7离子交换树脂，在4。C条件下振荡半小时。
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1楼 2011-10-20 13:08:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

王海鹏的

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
缺友情(金币+2): 鼓励应助交流！欢迎常来农林版！ 2011-10-22 17:54:14
szslg(金币+5): 2011-11-10 16:59:38
缺友情(农林EPI+1): 优秀应助，授予EPI，欢迎常来农林版！ 2011-11-12 10:39:46
孙启亮: 回帖置顶 2011-12-22 10:01:32
方法：80%甲醇低温研磨匀浆，1 OOOr/min离心30min ,取上清液，通过C18柱以去除植物色素。初纯化液用N2吹干、去除甲醇，加磷酸氢二钾HB. 0)溶解后，用乙酸乙酷萃取，水相(pH调至2. 5 )再用乙醇乙酷萃取(DHZRs与iPAs用正丁醇提取;ABA还需进行甲醋化)。N2吹干后加磷酸缓冲液溶解，用ELISA测定激素含量。
参见：周燮，植物激素IAA、GAs、CTKs与ABA的免疫检测技术，南京农业大学植物生理教研室编，1992
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抱元守一可得永年
6楼2011-10-22 12:26:12
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普通回帖

kukoob

铁杆木虫 (知名作家)

人类导师

【答案】应助回帖

叶子太少了！
看你选定什么叶子了！
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不知不觉
2楼2011-10-20 13:45:13
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szslg

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kukoob at 2011-10-20 13:45:13:
叶子太少了！
看你选定什么叶子了！

我前两天也试了试加1g的叶片还是不行。。。不知道是不是提取液的事？磷酸缓冲液能把叶片中的激素提取出来吗？
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3楼2011-10-20 13:54:56
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kukoob

铁杆木虫 (知名作家)

人类导师

【答案】应助回帖

★
缺友情(金币+1): 鼓励应助交流！欢迎常来农林版！ 2011-10-22 17:54:30
szslg(金币+5): 2011-11-10 16:59:28
缺友情: 回帖置顶 2011-12-22 10:47:43
磷酸缓冲液能把叶片中的激素提取出来吗？
我也怀疑这个！
你换换其他的液体试试！
反正也花不了多少钱！
最好同时多做几组不同的方案！
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不知不觉
4楼2011-10-20 13:59:22
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szslg

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by kukoob at 2011-10-20 13:59:22:
磷酸缓冲液能把叶片中的激素提取出来吗？
我也怀疑这个！
你换换其他的液体试试！
反正也花不了多少钱！
最好同时多做几组不同的方案！

Leaf tissue (20 mg) was ground with a mortar and a pestle
in liquid N, and homogenized in 1.5 mL Na-phosphate buffer
(0.05 M, pH 7.0) containing 0.02% (w/v) sodium diethyldithiocarbamate
as an antioxidant. An internal standard of
13C6–IAA (200 ng) was added into each sample and extracted
by continuous shaking for 1 h at 4°C. The samples were
transferred into 1.5-mL microcentrifuge tubes after extraction
and pH was adjusted to approximately 2.6 with 1.0 M
HCl (about 43 μL of HCl was required for 1 mL of extract).
The sample was slurried with 60 mg of Amberlite XAD-7
(Sigma, MO) for 30 min. After removal of the buff er, the
XAD-7 was washed with 2 × 500 μL of 1% acetic acid before
being slurried with 2 × 500 μL of dichloromethane for 2 ×
30 min (Edlund et al., 1995). The combined dichloromethane
fractions were reduced to dryness with nitrogen gas. Samples
were methylated with ethereal diazomethane at room temperature
according to Prinsen et al. (2000).
这是我们老师给我们的方法，他说可以，但是我就是测不出来~~郁闷啊，你说可能是咱们国产药品配制的缓冲液不准确的原因吗？
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5楼2011-10-20 14:12:39
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qixs2011

铁杆木虫 (著名写手)
楼上方法可靠。
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7楼2011-10-23 15:20:16
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hejun77

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

szslg(金币+5): 2011-11-10 16:59:47
看看流出液中有没有你的目标物，如果有，且含量较高，也可以收集洗脱液来达到富集的目的
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8楼2011-11-08 18:07:12
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农科山庄

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

szslg(金币+5): 2011-11-10 16:59:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by szslg at 2011-10-20 13:54:56:
我前两天也试了试加1g的叶片还是不行。。。不知道是不是提取液的事？磷酸缓冲液能把叶片中的激素提取出来吗？

要根据检测限、提取率、叶片含量，确定叶片取样量。必要时需考察方法的回收率，做加样回收。
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9楼2011-11-08 20:17:17
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刘凌燕

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 农科山庄 at 2011-11-08 20:17:17:
要根据检测限、提取率、叶片含量，确定叶片取样量。必要时需考察方法的回收率，做加样回收。

那请问回收率该怎么测定呢？加标应该加多少呢？多谢了！
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10楼2011-11-14 15:35:58
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