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junxiao0320

金虫 (小有名气)


[交流] 双酶切

用双酶切一个质粒,一个是76bp,一个是3400bp,用1%的胶和2%的胶都跑拉一遍,只有一条带3400bp,是那条太小吗?
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junxiao0320(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+3): 鼓励应助! 2011-10-22 15:31:35
1. 加大质粒和上样量。我们一般用100~300ng的质粒,用20微升的酶切体系,然后跑10微升(留一半是防着电泳出问题,如样品孔漏之类的)。用小孔的胶,使样品更浓缩条带更亮。

2.缩短电泳时间,100V的话一般10分钟就可以了。跑久了75bp的条带就跑到胶外面了。
4楼2011-10-19 21:01:54
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★ ★ ★ ★
junxiao0320(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+3): 鼓励应助! 2011-10-22 15:31:18
76bp太小了吧,标记的marker不知道多大?
不要等电泳跑完再照相,不然基本看不到小的那条带。。。
可以等电泳跑上10分钟照一照,这样或许会看到。。。
不过我奇怪的是楼主为什么要看到那段76bp的条带呢?
对于你后期的实验有什么帮助或者别的什么原因呢?
2楼2011-10-19 20:01:32
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friya0910

新虫 (正式写手)


★ ★
junxiao0320(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励应助! 2011-10-22 15:31:29
引用回帖:
1楼: Originally posted by junxiao0320 at 2011-10-19 19:48:03:
用双酶切一个质粒,一个是76bp,一个是3400bp,用1%的胶和2%的胶都跑拉一遍,只有一条带3400bp,是那条太小吗?

把酶切质粒浓度提高看看。
3楼2011-10-19 20:37:31
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三目

木虫 (小有名气)


★ ★
junxiao0320(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励应助! 2011-10-22 15:31:54
你可以分两次单酶切看看结果,不过你这个3400的,跟质粒有点难分开啊
6楼2011-10-19 23:06:14
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