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junxiao0320
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[交流]
双酶切
用双酶切一个质粒,一个是76bp,一个是3400bp,用1%的胶和2%的胶都跑拉一遍,只有一条带3400bp,是那条太小吗?
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1楼
2011-10-19 19:48:03
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junxiao0320
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引用回帖:
15楼
:
Originally posted by
peace12039088
at 2011-10-20 10:53:54:
如果不是回收的话,为什么非要看到76bp的带呢?76bp确实不够大,不易在胶上看到。如果你是想回收3kb多的片段再做下一步实验的话,那3kb多的片段上应该还有其它酶切位点吧,不知可否再选择其它合适的酶切位点来确定 ...
怎么用其他的酶,来确定是单酶切还是双酶切呢?
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21楼
2011-10-22 09:19:49
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天使托
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junxiao0320(金币
+1
):谢谢参与
wanhscn(金币+3): 鼓励应助! 2011-10-22 15:31:18
76bp太小了吧,标记的marker不知道多大?
不要等电泳跑完再照相,不然基本看不到小的那条带。。。
可以等电泳跑上10分钟照一照,这样或许会看到。。。
不过我奇怪的是楼主为什么要看到那段76bp的条带呢?
对于你后期的实验有什么帮助或者别的什么原因呢?
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2楼
2011-10-19 20:01:32
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friya0910
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junxiao0320(金币
+1
):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励应助! 2011-10-22 15:31:29
引用回帖:
1楼
:
Originally posted by
junxiao0320
at 2011-10-19 19:48:03:
用双酶切一个质粒,一个是76bp,一个是3400bp,用1%的胶和2%的胶都跑拉一遍,只有一条带3400bp,是那条太小吗?
把酶切质粒浓度提高看看。
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3楼
2011-10-19 20:37:31
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西瓜
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junxiao0320(金币
+1
):谢谢参与
wanhscn(金币+3): 鼓励应助! 2011-10-22 15:31:35
1. 加大质粒和上样量。我们一般用100~300ng的质粒,用20微升的酶切体系,然后跑10微升(留一半是防着电泳出问题,如样品孔漏之类的)。用小孔的胶,使样品更浓缩条带更亮。
2.缩短电泳时间,100V的话一般10分钟就可以了。跑久了75bp的条带就跑到胶外面了。
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4楼
2011-10-19 21:01:54
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