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junxiao0320

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切

用双酶切一个质粒，一个是76bp，一个是3400bp，用1%的胶和2%的胶都跑拉一遍，只有一条带3400bp，是那条太小吗？
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1楼 2011-10-19 19:48:03
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天使托

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by junxiao0320 at 2011-10-20 09:25:38:
最小的marker标记是100bp，因为单酶切3476同双酶切效果相似，没有看到小的条带，所以不知道是否是单酶切还是双酶切。

这个完全没有必要吧，你进行的是双酶切就可以了，关键还是在于你后期的连接了。。。
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16楼2011-10-20 12:29:34
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★ ★
junxiao0320(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-10-22 15:31:18
76bp太小了吧，标记的marker不知道多大？
不要等电泳跑完再照相，不然基本看不到小的那条带。。。
可以等电泳跑上10分钟照一照，这样或许会看到。。。
不过我奇怪的是楼主为什么要看到那段76bp的条带呢？
对于你后期的实验有什么帮助或者别的什么原因呢？
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2楼2011-10-19 20:01:32
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friya0910

新虫 (正式写手)
★ ★
junxiao0320(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-22 15:31:29
引用回帖:
1楼: Originally posted by junxiao0320 at 2011-10-19 19:48:03:
用双酶切一个质粒，一个是76bp，一个是3400bp，用1%的胶和2%的胶都跑拉一遍，只有一条带3400bp，是那条太小吗？

把酶切质粒浓度提高看看。
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3楼2011-10-19 20:37:31
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★
junxiao0320(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-10-22 15:31:35
1. 加大质粒和上样量。我们一般用100~300ng的质粒，用20微升的酶切体系，然后跑10微升（留一半是防着电泳出问题，如样品孔漏之类的）。用小孔的胶，使样品更浓缩条带更亮。

2.缩短电泳时间，100V的话一般10分钟就可以了。跑久了75bp的条带就跑到胶外面了。
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4楼2011-10-19 21:01:54
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