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fanger

银虫 (小有名气)

[求助] 求助裂解细胞又不降低酶活

看资料最好是超声波裂解细胞,可是我做的时候在裂解前后均有白色沉淀物,我认为是细胞,而且检测蛋白浓度很小,觉得没裂解好。
用裂解液裂解细胞,可能会对酶活有影响,但不确定对我的是否有影响一,我测的无参考值。
用反复冻融法裂解细胞,看资料效率不高,而且影响酶活。
目前我用的是裂解液裂解细胞,但不确定其实用价值,希望找到另一种可行方法, 本人倾向于超声波裂解方法,但奇怪的是加生理盐水以后的动物细胞(包括癌细胞)均有沉淀,是什么原因呢?还是超声波裂解细胞时加的溶液不是生理盐水而是别的东西?求各位大虾帮忙!急求解答!
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做好自己!
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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们用的超声波 结果还好
冷风过心变热
3楼2011-10-19 13:41:41
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bubble1220

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你有没有测酶活看一下?
我曾经做过实验比较,用的是超声破碎和液氮研磨,都对酶活没有影响
2楼2011-10-19 10:22:17
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

ip   可以测caspase酶活
4楼2011-10-19 19:38:44
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demixu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你的cell density很高的话,加生理盐水肯定很容易沉淀啊,我用超声波一般都是用Tris-Cl buffer来resuspend cell的
5楼2011-10-20 14:42:12
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