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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助裂解细胞又不降低酶活
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fanger

银虫 (小有名气)

[求助] 求助裂解细胞又不降低酶活

看资料最好是超声波裂解细胞，可是我做的时候在裂解前后均有白色沉淀物，我认为是细胞，而且检测蛋白浓度很小，觉得没裂解好。
用裂解液裂解细胞，可能会对酶活有影响，但不确定对我的是否有影响一，我测的无参考值。
用反复冻融法裂解细胞，看资料效率不高，而且影响酶活。
目前我用的是裂解液裂解细胞，但不确定其实用价值，希望找到另一种可行方法， 本人倾向于超声波裂解方法，但奇怪的是加生理盐水以后的动物细胞（包括癌细胞）均有沉淀，是什么原因呢？还是超声波裂解细胞时加的溶液不是生理盐水而是别的东西？求各位大虾帮忙！急求解答！
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做好自己！
1楼 2011-10-18 19:55:42
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bubble1220

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你有没有测酶活看一下？
我曾经做过实验比较，用的是超声破碎和液氮研磨，都对酶活没有影响
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2楼2011-10-19 10:22:17
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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们用的超声波 结果还好
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冷风过心变热
3楼2011-10-19 13:41:41
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

ip   可以测caspase酶活
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4楼2011-10-19 19:38:44
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demixu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你的cell density很高的话，加生理盐水肯定很容易沉淀啊，我用超声波一般都是用Tris-Cl buffer来resuspend cell的
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5楼2011-10-20 14:42:12
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lemonwanwan

新虫 (初入文坛)
楼主后来找到合适的裂解细胞的方法没，我之前试过RIPA裂解液和超声破碎，测胞内成分时候均没有效果，现在还在苦恼。。。。
想试一下反复冻融，也不知道会不会有影响
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6楼2015-11-12 13:44:14
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