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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 关于HPLC保留时间的问题
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zlong2008

木虫 (正式写手)

[求助] 关于HPLC保留时间的问题

这几天一直在做hplc.但是每天的标准品保留时间都不一样，而且是越来越长。最短的和最长的能够相差将近20分钟，刚开始没有用柱温箱，今天用了，柱压明显降低，但是保留时间却比没有用柱温箱的时候延长了。流动相是一样的，进样量也是一样的，请问问题出在哪里啊。是不是色谱柱有问题了啊。
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在压力中前进
1楼 2011-10-15 14:20:54
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yugijiang

木虫 (著名写手)
查一下你的系统有没有出问题，或者你的梯度运行后色谱柱还没有平衡好呢，加大点后运行时间。还有你的比例阀哪里是不是有问题
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13楼2012-06-07 10:55:50
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yumulin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zlong2008(金币+1): 谢谢，你的意思是说柱子被污染了吗？ 2011-10-15 15:26:56
qinhy(金币+1): 回帖奖励~ 2011-10-15 18:45:36
柱压在每一次都是一致的么？如果柱子不稳定，设一个梯度冲下柱子吧，最终冲洗比例是你流动相的比例，然后换上你的流动相。
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2楼2011-10-15 14:57:56
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zlong2008

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yumulin at 2011-10-15 14:57:56:
柱压在每一次都是一致的么？如果柱子不稳定，设一个梯度冲下柱子吧，最终冲洗比例是你流动相的比例，然后换上你的流动相。

今天的柱压都很稳定的，我用的是梯度洗脱，并且每次用完后，都用最初的流动相比例冲柱子，每次做完实验都按照说明书的要求做的。保留时间相差这么大很郁闷啊。
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在压力中前进
3楼2011-10-15 15:26:16
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alexsz1985

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-10-15 16:56:54
zlong2008(金币+1): 谢谢 2011-10-16 10:54:16
如果进样量、温度和其他参数都一样，而同一个样品的保留时间相差这么大，我觉得可能是色谱柱的问题，建议先等梯度跑标准品，调整流动相比例使得样品在10～20min之间出峰，然后重复进样5次，看看保留时间相差多少。如果还是很大的话，很可能是柱子的问题了，用异丙醇洗柱子吧，然后再试，要不换个柱子试试，也能找出来原因
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4楼2011-10-15 16:43:15
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