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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 5'race条带很弱，求各位虫友们帮我分析分析，怎样让条带再亮一些，急急急！！
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chen11086

铜虫 (初入文坛)

[求助] 5'race条带很弱，求各位虫友们帮我分析分析，怎样让条带再亮一些，急急急！！

最近在做5'RACE用的是clonetech的盒子，3‘还有结果，可是5’的总是条带很弱，做两次巢式还是不行，请各位虫友帮俺支支招。
图片左边marker边上的就是5'的条带。
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1楼 2011-10-14 11:42:52
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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR反应体系设计可能出了问题，建议优化后再扩
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不是風動，亦非幡動，仁者心動
7楼2011-12-12 00:37:05
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wuushu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-15 20:08:34
chen11086(金币+2): 2011-10-26 16:34:35
chen11086(金币+1): 2012-02-15 12:03:24
touch down+热启动
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

chen11086
该把乱七八糟的业余爱好收收了,专注于偶亲爱的生物!PaperandEnglish!
2楼2011-10-14 14:43:55
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chen11086

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuushu at 2011-10-14 14:43:55:
touch down+热启动

我就是用的TD，热启动，可是还是不行。
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3楼2011-10-18 09:40:53
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纳兰欣光

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

chen11086(金币+5): 2011-10-26 16:34:22
chen11086(金币+2): ★★★很有帮助 2012-02-15 12:03:10
引用回帖:
1楼: Originally posted by chen11086 at 2011-10-14 11:42:52:
最近在做5'RACE用的是clonetech的盒子，3‘还有结果，可是5’的总是条带很弱，做两次巢式还是不行，请各位虫友帮俺支支招。
图片左边marker边上的就是5'的条带。

PCR之前RNA浓度检测了没有啊？之前我做的时候，RNA量很少，结果做了INNER还是很弱的带，个人认为要严格按照试剂盒说明的RNA的量来做。再有你的3‘做的时候RNA 没有经过去磷酸化等处理，RNA量操作过程中基本没有损失的，但是5’就不是了。。。
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4楼2011-10-18 10:48:37
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