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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建好的质粒如何防止丢失
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

[求助] 构建好的质粒如何防止丢失

好不容易构建好一个重组质粒，在大肠杆菌中也能表达，但出现一个问题质粒会不会随菌体的传代而丢失呢，因为想应用于工业发酵，质粒丢失就不能表达相应蛋白了，那么如何防止传代过程中质粒的丢失呢，望高手指点。谢谢！
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1楼 2011-10-14 10:02:29
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zhange1987

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4594800楼: Originally posted by ganchao1776 at 2012-06-06 15:31:35
有这个可能，你可以重新转化一下，选10个单菌落，挑取表达最好的一个扩增后甘油保存，-80度可以保存8个月，用的时候拿一支做种子就行了...

谢谢 我刚随机选了两个单菌落摇瓶 结果一个长了 一个没长 这个概率也太大了 哎
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你不会找到路除非你敢于迷路加油。。。
11楼2012-06-07 09:33:35
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

不是有抗生素压力吗？质粒丢失了，菌就会死掉。
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-10-14 11:23:11
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2011-10-14 11:23:11:
不是有抗生素压力吗？质粒丢失了，菌就会死掉。

转化菌传代过程中我就没有再加抗生素了  当时加抗生素是为了筛选目的菌落 现在已经得到了转化菌株  所以觉得就没必要加抗生素了
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3楼2011-10-14 15:07:23
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-14 17:59:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暗夜懒猫 at 2011-10-14 15:07:23:
转化菌传代过程中我就没有再加抗生素了  当时加抗生素是为了筛选目的菌落 现在已经得到了转化菌株  所以觉得就没必要加抗生素了

不要觉得不加就不加啊，
肯定是要加的，不然质粒会丢失的。
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Thank-you，so-blue.
4楼2011-10-14 15:52:06
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