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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建好的质粒如何防止丢失
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

[求助] 构建好的质粒如何防止丢失

好不容易构建好一个重组质粒，在大肠杆菌中也能表达，但出现一个问题质粒会不会随菌体的传代而丢失呢，因为想应用于工业发酵，质粒丢失就不能表达相应蛋白了，那么如何防止传代过程中质粒的丢失呢，望高手指点。谢谢！
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1楼 2011-10-14 10:02:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小丹木木

荣誉版主 (著名写手)
直接把质粒提出来，风干，直接保存质粒
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12楼2012-06-07 13:48:03
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普通回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

不是有抗生素压力吗？质粒丢失了，菌就会死掉。
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Thank-you，so-blue.
2楼2011-10-14 11:23:11
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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2011-10-14 11:23:11:
不是有抗生素压力吗？质粒丢失了，菌就会死掉。

转化菌传代过程中我就没有再加抗生素了  当时加抗生素是为了筛选目的菌落 现在已经得到了转化菌株  所以觉得就没必要加抗生素了
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3楼2011-10-14 15:07:23
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-14 17:59:08
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暗夜懒猫 at 2011-10-14 15:07:23:
转化菌传代过程中我就没有再加抗生素了  当时加抗生素是为了筛选目的菌落 现在已经得到了转化菌株  所以觉得就没必要加抗生素了

不要觉得不加就不加啊，
肯定是要加的，不然质粒会丢失的。
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Thank-you，so-blue.
4楼2011-10-14 15:52:06
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-14 17:59:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暗夜懒猫 at 2011-10-14 15:07:23:
转化菌传代过程中我就没有再加抗生素了  当时加抗生素是为了筛选目的菌落 现在已经得到了转化菌株  所以觉得就没必要加抗生素了

不加容易丢失的！
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5楼2011-10-14 15:54:52
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丑牛1973

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-10-14 18:11:50
一定要加，不加容易长杂菌，转化菌株也没有竞争优势
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6楼2011-10-14 16:25:38
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weipufenxi

禁言 (小有名气)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励交流 2011-10-14 17:59:32
本帖内容被屏蔽
7楼2011-10-14 16:43:29
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

暗夜懒猫(金币+2): 2011-10-17 08:09:08
1.不管加不加抗生素，传代次数多了质粒拷贝数都会减少，蛋白表达水平都会下降
2.保存质粒是最安全保险的方法，每次用时可以重新转化
3.由于感受态制做时每一个菌所处的生理周期不同，所以转化后各个菌的表达水平大致可分为5个水平层次
4.由于第三个原因，所以发酵用的种子最好要经过筛选
5.筛选出好的单菌落要尽快做成种子库
6.在做种子库时要尽量减少传代次数
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8楼2011-10-16 14:07:38
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zhange1987

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2599832楼: Originally posted by ganchao1776 at 2011-10-16 14:07:38
1.不管加不加抗生素，传代次数多了质粒拷贝数都会减少，蛋白表达水平都会下降
2.保存质粒是最安全保险的方法，每次用时可以重新转化
3.由于感受态制做时每一个菌所处的生理周期不同，所以转化后各个菌的表达水平大 ...

请教 我最近做重组菌产酶实验 发现酶活越来越低 是不是可能质粒部分丢失了 实在是想不出其他原因 每次重复外界条件都一样 貌似就只有菌的问题了
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你不会找到路除非你敢于迷路加油。。。
9楼2012-06-06 15:05:29
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4594757楼: Originally posted by zhange1987 at 2012-06-06 15:05:29
请教 我最近做重组菌产酶实验 发现酶活越来越低 是不是可能质粒部分丢失了 实在是想不出其他原因 每次重复外界条件都一样 貌似就只有菌的问题了...

有这个可能，你可以重新转化一下，选10个单菌落，挑取表达最好的一个扩增后甘油保存，-80度可以保存8个月，用的时候拿一支做种子就行了
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zhange1987
10楼2012-06-06 15:31:35
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