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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lbpa.a.a

金虫 (小有名气)

[求助] 关于甲基化

我目前在做甲基化检测,亚硫酸氢钠处理一步用的QIAGEN的EpiTect® Bisulfite 试剂盒,最后一步从spin column上洗脱时加进20 uL洗脱液,离心后比这要少。处理前加入的gemonic DNA的量是已知的。我想问,最终的浓度该怎么算?要去紫外定量吗?
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

西瓜: 要求不严格的话这方法最好啦 2011-10-14 18:10:14
跑个胶用marker作个定量不就行了,很方便的。
2楼2011-10-13 21:24:16
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yubwer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

同学,我也快做甲基化检测了,请问你实验中一共买了哪些试剂盒呢?我参考一下
3楼2011-10-14 11:00:45
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lbpa.a.a

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-13 21:24:16:
跑个胶用marker作个定量不就行了,很方便的。

听过电泳定量,没做过,我们这边都是用紫外。  我不是嫌麻烦,是想知道应不应该定量,因为加入量是已知的。
4楼2011-10-14 16:12:26
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lbpa.a.a

金虫 (小有名气)


西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-14 18:10:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by yubwer at 2011-10-14 11:00:45:
同学,我也快做甲基化检测了,请问你实验中一共买了哪些试剂盒呢?我参考一下

一个提genomic DNA的,很多公司都在卖,不买试剂盒自己提也行。还有就是这个QIAGEN的EpiTect® Bisulfite 试剂盒,因为是新手,我怕做不好就选择了用试剂盒,这个也可以不用的。 甲基转移酶用的NEB的,货号M0226.
5楼2011-10-14 16:16:45
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weipufenxi

禁言 (小有名气)


wanhscn(金币+1): 鼓励应助! 2011-10-14 17:54:05
lbpa.a.a(金币+30): 这意思是需要定量喽,我加你为好友行不?我希望和你交流。 2011-10-14 19:17:20
本帖内容被屏蔽

6楼2011-10-14 17:02:36
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yubwer

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lbpa.a.a at 2011-10-14 16:16:45:
一个提genomic DNA的,很多公司都在卖,不买试剂盒自己提也行。还有就是这个QIAGEN的EpiTect® Bisulfite 试剂盒,因为是新手,我怕做不好就选择了用试剂盒,这个也可以不用的。 甲基转移酶用的NEB的,货号M ...

谢谢你!我也新手,做个参考
7楼2011-10-15 11:19:51
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yunnanruby

新虫 (初入文坛)

请问你用QIAGEN 甲基化修饰时,所有程序都是按照说明来做的吗?
我在修饰后做PCR,结果阴性对照(水)都有条带,试剂也重新换了,还是有。请问是引物的问题吗?
8楼2012-05-29 19:51:58
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lbpa.a.a

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4585939楼: Originally posted by yunnanruby at 2012-05-29 19:51:58
请问你用QIAGEN 甲基化修饰时,所有程序都是按照说明来做的吗?
我在修饰后做PCR,结果阴性对照(水)都有条带,试剂也重新换了,还是有。请问是引物的问题吗?

PCR有条带是在产物位置吗?   
是的话可能是PCR污染了.
9楼2012-05-31 14:58:47
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)

LZ你好。我也在用这个盒子做甲基化,想请教下终浓度这个问题解决了吗?我是用核酸测定仪测定了洗脱后的浓度,处理前加了2ug的DNA,处理后,发现》2ug,不知道该怎么解释?如果LZ能帮忙分析下,非常感谢!
Things change, people grow.
10楼2014-04-24 21:27:38
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