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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于甲基化
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lbpa.a.a

金虫 (小有名气)

[求助] 关于甲基化

我目前在做甲基化检测，亚硫酸氢钠处理一步用的QIAGEN的EpiTect® Bisulfite 试剂盒，最后一步从spin column上洗脱时加进20 uL洗脱液，离心后比这要少。处理前加入的gemonic DNA的量是已知的。我想问，最终的浓度该怎么算？要去紫外定量吗？
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1楼 2011-10-13 16:22:30
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

西瓜: 要求不严格的话这方法最好啦 2011-10-14 18:10:14
跑个胶用marker作个定量不就行了，很方便的。
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2楼2011-10-13 21:24:16
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yubwer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

同学，我也快做甲基化检测了，请问你实验中一共买了哪些试剂盒呢？我参考一下
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3楼2011-10-14 11:00:45
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lbpa.a.a

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-13 21:24:16:
跑个胶用marker作个定量不就行了，很方便的。

听过电泳定量，没做过，我们这边都是用紫外。  我不是嫌麻烦，是想知道应不应该定量，因为加入量是已知的。
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4楼2011-10-14 16:12:26
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lbpa.a.a

金虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-14 18:10:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by yubwer at 2011-10-14 11:00:45:
同学，我也快做甲基化检测了，请问你实验中一共买了哪些试剂盒呢？我参考一下

一个提genomic DNA的，很多公司都在卖，不买试剂盒自己提也行。还有就是这个QIAGEN的EpiTect® Bisulfite 试剂盒，因为是新手，我怕做不好就选择了用试剂盒，这个也可以不用的。 甲基转移酶用的NEB的，货号M0226.
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5楼2011-10-14 16:16:45
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weipufenxi

禁言 (小有名气)
★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-14 17:54:05
lbpa.a.a(金币+30): 这意思是需要定量喽，我加你为好友行不？我希望和你交流。 2011-10-14 19:17:20
本帖内容被屏蔽
6楼2011-10-14 17:02:36
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yubwer

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lbpa.a.a at 2011-10-14 16:16:45:
一个提genomic DNA的，很多公司都在卖，不买试剂盒自己提也行。还有就是这个QIAGEN的EpiTect® Bisulfite 试剂盒，因为是新手，我怕做不好就选择了用试剂盒，这个也可以不用的。 甲基转移酶用的NEB的，货号M ...

谢谢你！我也新手，做个参考
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7楼2011-10-15 11:19:51
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yunnanruby

新虫 (初入文坛)
请问你用QIAGEN 甲基化修饰时，所有程序都是按照说明来做的吗？
我在修饰后做PCR，结果阴性对照（水）都有条带，试剂也重新换了，还是有。请问是引物的问题吗？
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8楼2012-05-29 19:51:58
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lbpa.a.a

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4585939楼: Originally posted by yunnanruby at 2012-05-29 19:51:58
请问你用QIAGEN 甲基化修饰时，所有程序都是按照说明来做的吗？
我在修饰后做PCR，结果阴性对照（水）都有条带，试剂也重新换了，还是有。请问是引物的问题吗？

PCR有条带是在产物位置吗？   
是的话可能是PCR污染了.
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9楼2012-05-31 14:58:47
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胡乱走走2011

银虫 (著名写手)
LZ你好。我也在用这个盒子做甲基化，想请教下终浓度这个问题解决了吗？我是用核酸测定仪测定了洗脱后的浓度，处理前加了2ug的DNA，处理后，发现》2ug,不知道该怎么解释？如果LZ能帮忙分析下，非常感谢！
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Things change, people grow.
10楼2014-04-24 21:27:38
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