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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 环境 » 交流探讨 » 多糖超滤方面的问题，嘿嘿~~
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小皇帝余同学

银虫 (小有名气)

[求助] 多糖超滤方面的问题，嘿嘿~~

小弟做多糖，DEAE盐洗后HPLC跑出两个峰，一个分子量200多万刀，另一个大约几十万刀，第一步先用1000D的膜超滤除盐，接下来应该用多少的滤膜超滤样品把他们分离出来比较合适？Sample Text
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1楼 2011-10-10 21:02:22
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cxhjm

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

小皇帝余同学(金币+1): 2011-10-11 14:14:49
引用回帖:
1楼: Originally posted by 小皇帝余同学 at 2011-10-10 21:02:22:
小弟做多糖，DEAE盐洗后HPLC跑出两个峰，一个分子量200多万刀，另一个大约几十万刀，第一步先用1000D的膜超滤除盐，接下来应该用多少的滤膜超滤样品把他们分离出来比较合适？Sample Text

不同酒精浓度之前试过没，另一个到底是多少十万da
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2楼2011-10-11 10:43:15
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小皇帝余同学

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cxhjm at 2011-10-11 10:43:15:
不同酒精浓度之前试过没，另一个到底是多少十万da

另一个大约20万左右（我是用别人的标曲算得，只是估算），不同酒精浓度是指哪一步？
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3楼2011-10-11 14:11:26
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cxhjm

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kanavaro11(金币+1): 积极！欢迎常来！ 2011-10-12 20:19:13
小皇帝余同学(金币+4): 2011-11-01 09:34:56
不是先酒精极分，在上柱子的吗？分子量大的不是先析出来，小的后一点析出来？
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4楼2011-10-11 14:20:59
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小皇帝余同学

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cxhjm at 2011-10-11 14:20:59:
不是先酒精极分，在上柱子的吗？分子量大的不是先析出来，小的后一点析出来？

是的，不过我没有改变醇浓度，1:6的工业乙醇醇沉后干燥，干燥后加水上样，先水洗，再盐洗，水洗样品干燥后跑HPLC是一个峰，盐洗样品干燥后跑HPLc是两个峰
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5楼2011-10-11 20:36:31
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cxhjm

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小皇帝余同学 at 2011-10-11 20:36:31:
是的，不过我没有改变醇浓度，1:6的工业乙醇醇沉后干燥，干燥后加水上样，先水洗，再盐洗，水洗样品干燥后跑HPLC是一个峰，盐洗样品干燥后跑HPLc是两个峰

你跑出来，还两个相差这么大的两个峰？
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6楼2011-10-12 10:29:45
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小皇帝余同学

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cxhjm at 2011-10-12 10:29:45:
你跑出来，还两个相差这么大的两个峰？

是的，按标曲算两个峰的确差一个数量级，目前我正在超滤除盐，然后在跑一次高效看看如何，与干燥后再复溶的样品比较一下，是否还是两个峰
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7楼2011-10-12 10:38:12
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mssj300130

铜虫 (小有名气)
首先你的大小一个是2M一个是200K，200K的很难通过超滤去除的，即使是300K的膜包；另外你在上柱前的确应该考虑乙醇的分级沉淀，或者季铵盐等等，方法的话可以差一些多糖方面的文献，还有就是你除盐用1K的速度岂不是很慢很慢，用G-25 medium脱盐的话比较好应该，当然这样看你有多少样品了，样品比较多的话用大一点的膜包100K除盐可能都没问题的，上柱条件可以摸索一下，这两个都是酸性多糖，如果采用不同的盐浓度基本上会有一个分子量上的对应，这个跟做多糖疫苗的纯化比较相似
还有就是为什么不加分。。。
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8楼2012-04-10 14:42:42
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