应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 切胶回收
51/1返回列表
查看: 2370  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

[求助] 切胶回收 已有5人参与

请问各位前辈，切胶纯化的时候，用promega柱子回收需要哪些注意事项呢？
我们回收PCR产物，都是按照说明书操作的，可是回收率特别低，120ug的PCR产物回收后才得到2.5ug。谢谢咯！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-10-09 10:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2011-10-09 11:33:38:
根据你回收片段的大小<4kb，溶胶后适量加入些异丙醇大约与回收胶质量1:1。混匀后，上柱时让溶液冷却后与柱子结合两分钟再离心，75%乙醇洗涤完后可以打开盖在室内让酒精蒸发几分钟再加洗脱液，最好洗脱液在65℃ ...

谢谢~请问你是用promega回收试剂盒做的吗？是加入对应量的binding buffer,然后再加入等量的异丙醇吗？
赞一下 回复此楼
8楼2011-10-09 15:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

asznpb

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+4): 鼓励交流，祝顺利！ 2011-10-10 09:20:52
1,binding 和胶完全混合后挂柱子时候多重复两次，而且转速不宜太快，5000rpm足够了，再高就不大好了
2、75%乙醇洗涤完了注意要开盖空转，蒸发乙醇
3、洗脱的时候加双蒸水或elution buffer后在37℃放几分钟之后再离心洗脱
最后一步洗脱的时候多重复两次洗脱，每次用洗脱下的双蒸水或者elution buffer再重新加到柱子里重复洗脱
赞一下(2人) 回复此楼
显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-10-09 11:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+4): 鼓励交流，祝顺利！ 2011-10-10 09:22:34
根据你回收片段的大小<4kb，溶胶后适量加入些异丙醇大约与回收胶质量1:1。混匀后，上柱时让溶液冷却后与柱子结合两分钟再离心，75%乙醇洗涤完后可以打开盖在室内让酒精蒸发几分钟再加洗脱液，最好洗脱液在65℃温预一下，洗脱两次洗脱液体积不要太多。不知道能否解决你的问题。
赞一下(2人) 回复此楼
hehe
3楼2011-10-09 11:33:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asznpb

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
对了，忘了说了，楼上补充的很完整，如果太大或者太小的话需要再加入异丙醇，洗脱液最好65℃预热……洗脱液加到柱子里后再37℃放置几分钟
赞一下(1人) 回复此楼
显微镜下的世界很精彩！
4楼2011-10-09 12:19:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 9/450 2026-08-13 19:29 by 启萌科技
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 化学口download_prp&amp;fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭