24小时热门版块排行榜    

查看: 1880  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

[求助] 切胶回收 已有5人参与

请问各位前辈,切胶纯化的时候,用promega柱子回收需要哪些注意事项呢?
我们回收PCR产物,都是按照说明书操作的,可是回收率特别低,120ug的PCR产物回收后才得到2.5ug。谢谢咯!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asznpb

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
对了,忘了说了,楼上补充的很完整,如果太大或者太小的话需要再加入异丙醇,洗脱液最好65℃预热……洗脱液加到柱子里后再37℃放置几分钟
显微镜下的世界很精彩!
4楼2011-10-09 12:19:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

asznpb

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+4): 鼓励交流,祝顺利! 2011-10-10 09:20:52
1,binding 和胶完全混合后挂柱子时候多重复两次,而且转速不宜太快,5000rpm足够了,再高就不大好了
2、75%乙醇洗涤完了注意要开盖空转,蒸发乙醇
3、洗脱的时候加双蒸水或elution buffer后在37℃放几分钟之后再离心洗脱
最后一步洗脱的时候多重复两次洗脱,每次用洗脱下的双蒸水或者elution buffer再重新加到柱子里重复洗脱
显微镜下的世界很精彩!
2楼2011-10-09 11:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+4): 鼓励交流,祝顺利! 2011-10-10 09:22:34
根据你回收片段的大小<4kb,溶胶后适量加入些异丙醇大约与回收胶质量1:1。混匀后,上柱时让溶液冷却后与柱子结合两分钟再离心,75%乙醇洗涤完后可以打开盖在室内让酒精蒸发几分钟再加洗脱液,最好洗脱液在65℃温预一下,洗脱两次洗脱液体积不要太多。不知道能否解决你的问题。
hehe
3楼2011-10-09 11:33:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
洗脱液洗脱的不完全,在加洗脱液后,37度多放置一段时间,效果会好很多
6楼2011-10-09 15:37:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中国海洋大学,生物学,301分,求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 一志愿天大材料与化工(085600)总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀~
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +4 守候夕阳CF 2026-03-18 4/200 2026-03-18 22:16 by li123456789.
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考研] 0703化学求调剂 总分331 +3 ZY-05 2026-03-13 3/150 2026-03-18 10:58 by macy2011
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
信息提示
请填处理意见