24小时热门版块排行榜    

查看: 2330  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

[求助] 切胶回收 已有5人参与

请问各位前辈,切胶纯化的时候,用promega柱子回收需要哪些注意事项呢?
我们回收PCR产物,都是按照说明书操作的,可是回收率特别低,120ug的PCR产物回收后才得到2.5ug。谢谢咯!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangdi07

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
洗脱液洗脱的不完全,在加洗脱液后,37度多放置一段时间,效果会好很多
6楼2011-10-09 15:37:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

asznpb

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+4): 鼓励交流,祝顺利! 2011-10-10 09:20:52
1,binding 和胶完全混合后挂柱子时候多重复两次,而且转速不宜太快,5000rpm足够了,再高就不大好了
2、75%乙醇洗涤完了注意要开盖空转,蒸发乙醇
3、洗脱的时候加双蒸水或elution buffer后在37℃放几分钟之后再离心洗脱
最后一步洗脱的时候多重复两次洗脱,每次用洗脱下的双蒸水或者elution buffer再重新加到柱子里重复洗脱
显微镜下的世界很精彩!
2楼2011-10-09 11:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+4): 鼓励交流,祝顺利! 2011-10-10 09:22:34
根据你回收片段的大小<4kb,溶胶后适量加入些异丙醇大约与回收胶质量1:1。混匀后,上柱时让溶液冷却后与柱子结合两分钟再离心,75%乙醇洗涤完后可以打开盖在室内让酒精蒸发几分钟再加洗脱液,最好洗脱液在65℃温预一下,洗脱两次洗脱液体积不要太多。不知道能否解决你的问题。
hehe
3楼2011-10-09 11:33:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asznpb

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
对了,忘了说了,楼上补充的很完整,如果太大或者太小的话需要再加入异丙醇,洗脱液最好65℃预热……洗脱液加到柱子里后再37℃放置几分钟
显微镜下的世界很精彩!
4楼2011-10-09 12:19:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +5 布布和一二 2026-08-10 6/300 2026-08-10 18:03 by Tide man
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&amp;fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
请填处理意见