应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 切胶回收
汕头大学海洋科学接受调剂
52/1返回列表
查看: 1946  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

[求助] 切胶回收 已有5人参与

请问各位前辈，切胶纯化的时候，用promega柱子回收需要哪些注意事项呢？
我们回收PCR产物，都是按照说明书操作的，可是回收率特别低，120ug的PCR产物回收后才得到2.5ug。谢谢咯！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-10-09 10:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wangdandelia at 2011-10-09 16:00:06:
灰常感谢！能说一下这样做的原理吗？

异丙醇可以尽可能多的析出DNA，就像DNA在75%酒精里析出一样，且易挥发。加异丙醇一般是在Binding buffer融化胶后加入的。其实胶回收所有产品都差不多。一般不加也可以，如果回收量小时可以试一下。我没用过Promega的胶回收，一般是用天根的产品和Axygen的产品。
赞一下 回复此楼
hehe
18楼2011-10-10 10:43:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

asznpb

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+4): 鼓励交流，祝顺利！ 2011-10-10 09:20:52
1,binding 和胶完全混合后挂柱子时候多重复两次，而且转速不宜太快，5000rpm足够了，再高就不大好了
2、75%乙醇洗涤完了注意要开盖空转，蒸发乙醇
3、洗脱的时候加双蒸水或elution buffer后在37℃放几分钟之后再离心洗脱
最后一步洗脱的时候多重复两次洗脱，每次用洗脱下的双蒸水或者elution buffer再重新加到柱子里重复洗脱
赞一下(2人) 回复此楼
显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-10-09 11:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
adslye(金币+4): 鼓励交流，祝顺利！ 2011-10-10 09:22:34
根据你回收片段的大小<4kb，溶胶后适量加入些异丙醇大约与回收胶质量1:1。混匀后，上柱时让溶液冷却后与柱子结合两分钟再离心，75%乙醇洗涤完后可以打开盖在室内让酒精蒸发几分钟再加洗脱液，最好洗脱液在65℃温预一下，洗脱两次洗脱液体积不要太多。不知道能否解决你的问题。
赞一下(2人) 回复此楼
hehe
3楼2011-10-09 11:33:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asznpb

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
对了，忘了说了，楼上补充的很完整，如果太大或者太小的话需要再加入异丙醇，洗脱液最好65℃预热……洗脱液加到柱子里后再37℃放置几分钟
赞一下(1人) 回复此楼
显微镜下的世界很精彩！
4楼2011-10-09 12:19:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂学校 +11 不会吃肉 2026-04-13 12/600 2026-04-14 19:38 by Art1977
[考研] 08工学 309分求调剂 +12 Yin DY 2026-04-08 12/600 2026-04-14 17:49 by lhj2009
[考研] 求调剂 +16 雪逢冬 2026-04-10 16/800 2026-04-14 14:27 by 逆水乘风
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +24 好好休息好不好 2026-04-09 27/1350 2026-04-13 22:22 by pies112
[考研] 材料复试求调剂 +24 xhhdjdjsjks 2026-04-09 24/1200 2026-04-13 15:49 by 幸免 ..
[考研] 生物学调剂，一志愿西南大学348，Top期刊一区二作、二区三作，三等奖学金三次 +5 candyyyi 2026-04-09 5/250 2026-04-13 09:02 by 可淡不可忘
[考研] 326求调剂 +6 Shansyn 2026-04-10 6/300 2026-04-12 09:46 by hammer3
[考研] 求调剂，一志愿材料科学与工程985，365分， +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 调剂 +6 青灯不负 2026-04-09 6/300 2026-04-11 20:35 by dongdian1
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 电子信息279求调剂，有书读就行 +8 wwwooden 2026-04-08 11/550 2026-04-11 20:22 by cq2548
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +3 加大号饭盒袋 2026-04-10 3/150 2026-04-10 22:23 by 286640313
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 材料专硕初试分332一志愿西北工业大学， +12 故人?? 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:34 by Ccclqqq
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭