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First, 293 cells stably expressing Moloney gag and pol under control of cytomegalovirus (CMV) promoter-enhancer were transiently transfected by CaPO4 precipitation with 20 ug of pLXSN retroviral vector and 5 ug of the plasmid pMDG containing the vesicular stomatitis virus (VSVg) envelope downstream of the CMV promoter-enhancer. and a 100 ul sample was loaded into disposable chambers and centrifuged for 1 min onto glass slides in a cytocentrifuge。Staining was verified by visualization under a light microscope, and the slides were mounted with glass cover slips with the use of Permount mounting media 。The population of cells was categorized as either viable, apoptotic, or necrotic when analyzed by staining morphology. Counting was performed blind, meaning that each slide was given a number and the identity of each sample was not known during counting. The counting procedure made use of a light microscope at a magnification that allowed the incorporation of about 100 cells per field. Five fields were counted per slide, and each experimental condition was performed two times. |
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xiaokaizi
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2楼2011-10-04 11:04:41
zhiqiancsu
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373668567(金币+1, 翻译EPI+1): 不带这么玩的哈，在线翻译！ 2011-10-06 23:18:22
sltmac(金币-5, 翻译EPI-1): 机器翻译，EPI撤销，并扣5BB以示警戒~~~ 2011-10-07 08:24:06
sltmac: 2011-10-07 08:24:20
373668567(金币+1, 翻译EPI+1): 不带这么玩的哈，在线翻译！ 2011-10-06 23:18:22
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首先，293细胞中稳定表达莫洛尼GAG和POL下控制巨细胞病毒（CMV）启动子增强瞬时转染CaPO4降水20微克的逆转录病毒载体PLXSN和5质粒含有水泡性口炎病毒（VSVg）PMDG UG信封下游CMV启动子增强。 销售100微升样品装入一次性商会cytocentrifuge在1分钟到玻片离心染色光镜下可视化验证，并安装与使用Permount安装媒体的玻璃盖玻片的幻灯片。。细胞的人口被归类为 无论是可行的，细胞凋亡或坏死时，染色形态分析。点票是盲目的，意味着每张幻灯片被赋予了每个样本的数量和身份，没有在计数。点票程序在使用光学显微镜的放大，使约100个细胞每场纳入。五个领域分别计数每张幻灯片，每个实验条件下进行两次。 |
3楼2011-10-06 18:41:10
agyz_0970
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4楼2011-10-06 19:23:23
fjtony163
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5楼2011-10-08 08:39:59
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6楼2011-10-11 14:22:43
fjtony163
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【答案】应助回帖
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sltmac: 欢迎常来~ 2011-10-14 08:52:21
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首先，在巨细胞病毒（CMV）启动子的增强子控制下，293个稳定表达莫罗尼氏病毒“GAG和POL”（这个我不知道是啥）的细胞，被磷酸钙沉淀、20微克的逆转录病毒载体PLXSN、5微克含有水泡性口炎病毒（VSVg） pMDG质粒快速转染。 将100微升样品装入一次性容器内。在细胞离心机内离心1分钟后放到玻片上。在光学显微镜下直接验证染色，然后使用Permount安装媒介将玻片和盖玻片结合。根据染色后的形态，细胞的群体被分类为能生存的，凋亡的，或者坏死的。直接计数将是随机，意味着对于每块玻片，数值和类别在计数过程中不知道的。计数过程将在光学显微镜下进行，视野中约有100个细胞。每块玻片取五个可视区域，每种实验条件下进行两次计数。 有一些术语查不到，应该差不多了 |
7楼2011-10-11 14:56:09
