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hrjxx

新虫 (小有名气)

[求助] 大家可以看懂这样的蛋白提取方法吗?(用于双向)

1.Cut the tissue in several small pieces, add 10 ml ice chilled lysis buffer (150 mM phosphate buffer pH 7.5, 0.5 % Triton x-100, 1 mM PMSF, 15 ug/ml Aprotinin, 10 ug/ml Leupeptin, 10 ug/ml Pepstatin) and homogenize (best with an electrical tissue homogenizer 3x1min, prevent from warming up through ice-water
bath) until cells are broken.
2.Transfer homogenate into 1.5 ml micro centrifuge tubes and spin for 15 min at 4 deg. Pool supernatant (~ 9 ml) determine protein concentration using a detergent compatible assay.
上面是我看到的双向的提取方法,一直看的不是很明白,不知道哪位高手可以给讲解下?我的疑点主要有两个,1.这是小颗粒的样品,没有研碎成粉末,这样能够裂解吗?2.蛋白可以很好的溶于磷酸盐缓冲液吗??后面还要直接测定上清呢
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【答案】应助回帖

★ ★
hrjxx(金币+1): 谢谢啊,这个双向的裂解液,用尿素却区别在哪呢? 2011-10-05 20:14:57
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-10-07 21:37:40
hrjxx(金币+1): 这和这个裂解液的区别在哪呢(9M尿素,4%CHAPS) 2011-10-12 20:13:28
这个显然是针对新鲜组织提取蛋白的方法呀 如果你是小颗粒样品可以先用液氮研磨,然后加裂解液,再按照后面步骤匀浆。磷酸盐缓冲液缓冲能力很强的,一般可溶性蛋白都没问题,实在不行你就要查查文献,看看别人怎么玩的,这个具体原因要具体分析了……
可以用QQ找我……
2楼2011-10-04 12:51:55
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