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wlihust

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[交流] 检测动物细胞里是否含有我的目的基因？

我需要检测我的目的基因是否插入到动物细胞的基因组中，所以一般的流程是我先提取动物基因组，然后做pcr。但是我这样做行不行：直接把动物细胞高温裂解，然后用裂解液做我的pcr模板，就跟做细菌里目的基因检测一样的。 不知道我这样做行不行？
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1楼 2011-10-02 10:04:13
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zhangxn2010

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★ ★ ★
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wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-02 14:10:03
其实也可以，不过即使做不出来条带不能说明你的目的基因没有转进去；
动物基因组比较大，如果你的插入基因单拷贝，就算提纯的基因组不见得能顺利做出来，何况是细胞裂解液？
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2楼2011-10-02 12:53:56
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红多多

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
帅哥你偷懒的技术和哥哥我绝对有得一拼。
但是我恐怕要告诉你，这样是做不出来的，因为哥哥我早在研一的时候就试过这样偷懒了。结果——失败
后来分析原因可能有以下几点
其1 就是楼上一帅哥说的，片段很大，而且裂解液里面成分很复杂，东西出不来很正常。但是细胞能裂解，除非是使用裂解液的情况下，煮肯定是不行的（原因见下），但是如果加入裂解液，帅哥，我敢保证你的TAQ酶或者PFU绝对是发挥不了其功能的。
其2 哥哥我认为细胞在用热水中那么一煮，马上就结成一块了，想想平时在家里煮排骨的情景就明白了，道理是一样的。细菌细胞膜成分和动物植物都不一样，学过微生物的应该都明白。所以煮一煮当然是不可以的。
其3 真核生物基因组是附着在染色体上面的，煮一煮只会让蛋白变性后将DNA包裹的更紧密，所以……
偷懒的想法很好，哥哥我也喜欢偷懒，志同道合啊，哈哈。
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3楼2011-10-04 13:33:01
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