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20060992

铜虫 (小有名气)

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[交流] 伊维菌素荧光检测

现在在摸索伊维菌素检测条件，用甲醇来稀释伊维菌素，采用外表法，我现在用的是最大浓度100ng/ml进行检测。我配置了1000ng/ml，取100ul于EP管中，在加900ul的甲醇使其浓度为100ng/ml，同时我做个空白对照，就是空EP管中加入1ml甲醇，而后将其放入烘箱中使其至干，而后向吹干的样品中加入100 µL 衍生化试剂N-甲基咪唑液，涡动30 s，再加入150 µL 三氟醋酸酐液，涡动30 s。后加入750µL甲醇涡动混匀，避光衍生化反应30 min。0.22 µm滤膜过滤后进HPLC分析，进样量为50 µL。
我不知道我的处理是否有错误，我在摸索流动相，但是无论我选何种比例，空白样品在T点出峰，而样品在T点还有峰，但是唯一区别峰面积不一样，而且相差的大。我用过流动相得比例有100%甲醇，98:2的甲醇：水，94:6甲醇：水，66:34乙腈：甲醇，所以那位能给指点下怎么样才能将空白样品的溶剂峰和样品峰分开？

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