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伊维菌素荧光检测
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现在在摸索伊维菌素检测条件,用甲醇来稀释伊维菌素,采用外表法,我现在用的是最大浓度100ng/ml进行检测。我配置了1000ng/ml,取100ul于EP管中,在加900ul的甲醇使其浓度为100ng/ml,同时我做个空白对照,就是空EP管中加入1ml甲醇,而后将其放入烘箱中使其至干,而后向吹干的样品中加入100 µL 衍生化试剂N-甲基咪唑液,涡动30 s,再加入150 µL 三氟醋酸酐液,涡动30 s。后加入750µL甲醇涡动混匀,避光衍生化反应30 min。0.22 µm滤膜过滤后进HPLC分析,进样量为50 µL。 我不知道我的处理是否有错误,我在摸索流动相,但是无论我选何种比例,空白样品在T点出峰,而样品在T点还有峰,但是唯一区别峰面积不一样,而且相差的大。我用过流动相得比例有100%甲醇,98:2的甲醇:水,94:6甲醇:水,66:34乙腈:甲醇,所以那位能给指点下怎么样才能将空白样品的溶剂峰和样品峰分开? |
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