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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白经透析袋透析后出现浑浊，急求高手帮忙~！
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

[求助] 蛋白经透析袋透析后出现浑浊，急求高手帮忙~！

如题。我是经镍柱纯化的蛋白（含高浓度咪唑），所以纯化后再冰上透析一次降低纯化蛋白中的咪唑含量~已经是第二次了，过夜透析后发现透析袋内酶液变浑浊，呈乳白色浑浊状~离心后上清透明。有没有虫虫遇到这种情况，急求原因~万分感谢
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仕不可不弘毅，任重而道远
1楼 2011-09-19 22:27:14
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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
墨香若水(金币+2): 谢谢~纯化和透析我用的是同一Buffer,只是透析液没咪唑~~应该不存在盐离子高低吧？ 2011-09-21 09:10:11
lstt09nk(金币+5): 鼓励下 2011-09-21 10:10:36
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 14:04:50
我也经常遇到这个问题，对于以上位的建议，有疑义。
    透析后，蛋白溶液出现沉淀，都是析出的蛋白质形成的。这主要是由于目的蛋白在纯化是盐离子高，因此，蛋白的溶解度也高，当透析后，咪唑浓度降低，盐离子也相应降低了，致使蛋白溶解度降低，从而析出，形成白色沉淀。这属于正常现象。
    这里需要指出，析出的蛋白与蛋白变性没有太大关系，这应该和你蛋白的稳定相关，有些蛋白（如RNA酶、蛋白酶K等）都是干粉状态的，但仍然保持很高的酶活性。所以，你析出的蛋白若是之前就没有经过变性处理，那么在透析后的蛋白变性的可能性也不大。
    建议，透析后的蛋白可以直接使用，若是浓度很高的话，可以离心保留上清中的可溶蛋白。
    另外，纯化和透析过程最好选用相同的buffer。
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墨香若水
8楼2011-09-20 20:00:06
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临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
墨香若水(金币+6): 谢谢~我使用lysis buffer透析的（但没咪唑）~请问我离心后的沉淀就是我要的蛋白吗？那是不是已经变性了？ 2011-09-19 23:10:40
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-09-20 12:24:22
经常遇到的啊，可能是蛋白浓度太高了，你可以尝试大剂量稀释后在透析。也可能是你透析的buffer变换的太剧烈了，你可以先透析到lysis buffer在透析到你的buffer中，应该不会有沉淀的，我尝试过。
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2楼2011-09-19 22:54:31
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
引用回帖:
2楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-09-19 22:54:31:
经常遇到的啊，可能是蛋白浓度太高了，你可以尝试大剂量稀释后在透析。也可能是你透析的buffer变换的太剧烈了，你可以先透析到lysis buffer在透析到你的buffer中，应该不会有沉淀的，我尝试过。

谢谢~我使用lysis buffer透析的（但没咪唑）~请问我离心后的沉淀就是我要的蛋白吗？那是不是已经变性了？
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仕不可不弘毅，任重而道远
3楼2011-09-19 23:11:25
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临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 墨香若水 at 2011-09-19 23:11:25:
谢谢~我使用lysis buffer透析的（但没咪唑）~请问我离心后的沉淀就是我要的蛋白吗？那是不是已经变性了？

沉淀的是变性的蛋白，不能用的，有活性的蛋白还在上清中
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4楼2011-09-19 23:15:04
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