| 查看: 5817 | 回复: 12 | ||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
墨香若水木虫 (著名写手)
小小囧虫
|
[求助]
蛋白经透析袋透析后出现浑浊，急求高手帮忙~！
|
|
如题。我是经镍柱纯化的蛋白（含高浓度咪唑），所以纯化后再冰上透析一次降低纯化蛋白中的咪唑含量~已经是第二次了，过夜透析后发现透析袋内酶液变浑浊，呈乳白色浑浊状~离心后上清透明。有没有虫虫遇到这种情况，急求原因~万分感谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
明天应该可查了！？
已经有5人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有7人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有8人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
人气不行了
已经有10人回复
-
我面上完蛋了
已经有10人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有24人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有17人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 透析袋透析蛋白后，透析袋上有沉淀的蛋白，怎么处理？
已经有3人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- 纳米粒的体外释放为什么要用透析袋法？
已经有9人回复
- 【求助】求助使用过透析袋的朋友 关于透析袋的问题
已经有15人回复
- 【求助】透析袋的使用范围
已经有14人回复
- 【求助】在线等 纳米粒测释放度 透析袋有什么要求么
已经有14人回复
- 【求助】透析袋的使用问题
已经有8人回复
- 【求助】求助透析袋子的使用问题。
已经有3人回复
- 【交流】透析袋的使用
已经有14人回复
- 【求助/交流】请教：血红蛋白透析后什么条件浓缩在过sephadexG-75 啊
已经有5人回复
bioartist
木虫 (正式写手)
无菌草莓
- BioEPI: 1
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2012.9
- 红花: 4
- 帖子: 611
- 在线: 105.2小时
- 虫号: 419482
- 注册: 2007-07-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
墨香若水(金币+2): 谢谢~纯化和透析我用的是同一Buffer,只是透析液没咪唑~~应该不存在盐离子高低吧？ 2011-09-21 09:10:11
lstt09nk(金币+5): 鼓励下 2011-09-21 10:10:36
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 14:04:50
墨香若水(金币+2): 谢谢~纯化和透析我用的是同一Buffer,只是透析液没咪唑~~应该不存在盐离子高低吧？ 2011-09-21 09:10:11
lstt09nk(金币+5): 鼓励下 2011-09-21 10:10:36
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 14:04:50
|
我也经常遇到这个问题，对于以上位的建议，有疑义。 透析后，蛋白溶液出现沉淀，都是析出的蛋白质形成的。这主要是由于目的蛋白在纯化是盐离子高，因此，蛋白的溶解度也高，当透析后，咪唑浓度降低，盐离子也相应降低了，致使蛋白溶解度降低，从而析出，形成白色沉淀。这属于正常现象。 这里需要指出，析出的蛋白与蛋白变性没有太大关系，这应该和你蛋白的稳定相关，有些蛋白（如RNA酶、蛋白酶K等）都是干粉状态的，但仍然保持很高的酶活性。所以，你析出的蛋白若是之前就没有经过变性处理，那么在透析后的蛋白变性的可能性也不大。 建议，透析后的蛋白可以直接使用，若是浓度很高的话，可以离心保留上清中的可溶蛋白。 另外，纯化和透析过程最好选用相同的buffer。 |
墨香若水8楼2011-09-20 20:00:06
临风7071
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2167.6
- 散金: 79
- 红花: 7
- 帖子: 617
- 在线: 553.9小时
- 虫号: 555997
- 注册: 2008-05-10
- 性别: GG
- 专业: 植物生殖生物学
2楼2011-09-19 22:54:31
墨香若水
木虫 (著名写手)
小小囧虫
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 3059.1
- 散金: 942
- 红花: 10
- 沙发: 1
- 帖子: 1408
- 在线: 255.2小时
- 虫号: 528502
- 注册: 2008-03-19
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2011-09-19 23:11:25
临风7071
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2167.6
- 散金: 79
- 红花: 7
- 帖子: 617
- 在线: 553.9小时
- 虫号: 555997
- 注册: 2008-05-10
- 性别: GG
- 专业: 植物生殖生物学
4楼2011-09-19 23:15:04
