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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

[求助] 蛋白经透析袋透析后出现浑浊,急求高手帮忙~!

如题。我是经镍柱纯化的蛋白(含高浓度咪唑),所以纯化后再冰上透析一次降低纯化蛋白中的咪唑含量~已经是第二次了,过夜透析后发现透析袋内酶液变浑浊,呈乳白色浑浊状~离心后上清透明。有没有虫虫遇到这种情况,急求原因~万分感谢
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仕不可不弘毅,任重而道远
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

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2楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-09-19 22:54:31:
经常遇到的啊,可能是蛋白浓度太高了,你可以尝试大剂量稀释后在透析。也可能是你透析的buffer变换的太剧烈了,你可以先透析到lysis buffer在透析到你的buffer中,应该不会有沉淀的,我尝试过。

谢谢~我使用lysis buffer透析的(但没咪唑)~请问我离心后的沉淀就是我要的蛋白吗?那是不是已经变性了?
仕不可不弘毅,任重而道远
3楼2011-09-19 23:11:25
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

引用回帖:
4楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-09-19 23:15:04:
沉淀的是变性的蛋白,不能用的,有活性的蛋白还在上清中

不会吧,好多啊,一大坨~我的蛋白啊
仕不可不弘毅,任重而道远
5楼2011-09-19 23:33:38
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墨香若水

木虫 (著名写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by bioartist at 2011-09-20 20:00:06:
我也经常遇到这个问题,对于以上位的建议,有疑义。
    透析后,蛋白溶液出现沉淀,都是析出的蛋白质形成的。这主要是由于目的蛋白在纯化是盐离子高,因此,蛋白的溶解度也高,当透析后,咪唑浓度降低,盐离子也 ...

10楼2011-09-21 09:10:45
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by lhczj at 2011-09-21 08:49:32:
如果目的是想把咪唑去除的话也可以采用G-25层析的方法,因为时间要比透析短,故如果沉淀的话可以很快的看到结果,且操作方便,条件温和,个人感觉透析时间长,发生意外的机会较大,比如透析袋没夹紧,有时还会破裂

谢谢交流
仕不可不弘毅,任重而道远
11楼2011-09-21 09:14:04
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