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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
墨香若水(金币+2): 谢谢~纯化和透析我用的是同一Buffer,只是透析液没咪唑~~应该不存在盐离子高低吧？ 2011-09-21 09:10:11
lstt09nk(金币+5): 鼓励下 2011-09-21 10:10:36
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 14:04:50

我也经常遇到这个问题，对于以上位的建议，有疑义。
透析后，蛋白溶液出现沉淀，都是析出的蛋白质形成的。这主要是由于目的蛋白在纯化是盐离子高，因此，蛋白的溶解度也高，当透析后，咪唑浓度降低，盐离子也相应降低了，致使蛋白溶解度降低，从而析出，形成白色沉淀。这属于正常现象。
这里需要指出，析出的蛋白与蛋白变性没有太大关系，这应该和你蛋白的稳定相关，有些蛋白（如RNA酶、蛋白酶K等）都是干粉状态的，但仍然保持很高的酶活性。所以，你析出的蛋白若是之前就没有经过变性处理，那么在透析后的蛋白变性的可能性也不大。
建议，透析后的蛋白可以直接使用，若是浓度很高的话，可以离心保留上清中的可溶蛋白。
另外，纯化和透析过程最好选用相同的buffer。