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墨香若水木虫 (著名写手)
小小囧虫
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[求助]
蛋白经透析袋透析后出现浑浊，急求高手帮忙~！
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如题。我是经镍柱纯化的蛋白（含高浓度咪唑），所以纯化后再冰上透析一次降低纯化蛋白中的咪唑含量~已经是第二次了，过夜透析后发现透析袋内酶液变浑浊，呈乳白色浑浊状~离心后上清透明。有没有虫虫遇到这种情况，急求原因~万分感谢 |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
墨香若水(金币+2): 谢谢~纯化和透析我用的是同一Buffer,只是透析液没咪唑~~应该不存在盐离子高低吧？ 2011-09-21 09:10:11
lstt09nk(金币+5): 鼓励下 2011-09-21 10:10:36
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 14:04:50
墨香若水(金币+2): 谢谢~纯化和透析我用的是同一Buffer,只是透析液没咪唑~~应该不存在盐离子高低吧？ 2011-09-21 09:10:11
lstt09nk(金币+5): 鼓励下 2011-09-21 10:10:36
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 14:04:50
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我也经常遇到这个问题，对于以上位的建议，有疑义。 透析后，蛋白溶液出现沉淀，都是析出的蛋白质形成的。这主要是由于目的蛋白在纯化是盐离子高，因此，蛋白的溶解度也高，当透析后，咪唑浓度降低，盐离子也相应降低了，致使蛋白溶解度降低，从而析出，形成白色沉淀。这属于正常现象。 这里需要指出，析出的蛋白与蛋白变性没有太大关系，这应该和你蛋白的稳定相关，有些蛋白（如RNA酶、蛋白酶K等）都是干粉状态的，但仍然保持很高的酶活性。所以，你析出的蛋白若是之前就没有经过变性处理，那么在透析后的蛋白变性的可能性也不大。 建议，透析后的蛋白可以直接使用，若是浓度很高的话，可以离心保留上清中的可溶蛋白。 另外，纯化和透析过程最好选用相同的buffer。 |
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8楼2011-09-20 20:00:06
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2楼2011-09-19 22:54:31
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3楼2011-09-19 23:11:25
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4楼2011-09-19 23:15:04
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5楼2011-09-19 23:33:38
，一看就是大肠杆菌表达的哇，降低点蛋白浓度透析。 6楼2011-09-19 23:56:23
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10楼2011-09-21 09:10:45
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