应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白经透析袋透析后出现浑浊，急求高手帮忙~！
131/2返回列表12下一页
查看: 5000  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

[求助] 蛋白经透析袋透析后出现浑浊，急求高手帮忙~！

如题。我是经镍柱纯化的蛋白（含高浓度咪唑），所以纯化后再冰上透析一次降低纯化蛋白中的咪唑含量~已经是第二次了，过夜透析后发现透析袋内酶液变浑浊，呈乳白色浑浊状~离心后上清透明。有没有虫虫遇到这种情况，急求原因~万分感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
仕不可不弘毅，任重而道远
1楼 2011-09-19 22:27:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
墨香若水(金币+2): 谢谢~纯化和透析我用的是同一Buffer,只是透析液没咪唑~~应该不存在盐离子高低吧？ 2011-09-21 09:10:11
lstt09nk(金币+5): 鼓励下 2011-09-21 10:10:36
silicare(BioEPI+1): 2011-09-21 14:04:50
我也经常遇到这个问题，对于以上位的建议，有疑义。
    透析后，蛋白溶液出现沉淀，都是析出的蛋白质形成的。这主要是由于目的蛋白在纯化是盐离子高，因此，蛋白的溶解度也高，当透析后，咪唑浓度降低，盐离子也相应降低了，致使蛋白溶解度降低，从而析出，形成白色沉淀。这属于正常现象。
    这里需要指出，析出的蛋白与蛋白变性没有太大关系，这应该和你蛋白的稳定相关，有些蛋白（如RNA酶、蛋白酶K等）都是干粉状态的，但仍然保持很高的酶活性。所以，你析出的蛋白若是之前就没有经过变性处理，那么在透析后的蛋白变性的可能性也不大。
    建议，透析后的蛋白可以直接使用，若是浓度很高的话，可以离心保留上清中的可溶蛋白。
    另外，纯化和透析过程最好选用相同的buffer。
赞一下(4人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

墨香若水
8楼2011-09-20 20:00:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
墨香若水(金币+6): 谢谢~我使用lysis buffer透析的（但没咪唑）~请问我离心后的沉淀就是我要的蛋白吗？那是不是已经变性了？ 2011-09-19 23:10:40
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-09-20 12:24:22
经常遇到的啊，可能是蛋白浓度太高了，你可以尝试大剂量稀释后在透析。也可能是你透析的buffer变换的太剧烈了，你可以先透析到lysis buffer在透析到你的buffer中，应该不会有沉淀的，我尝试过。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-09-19 22:54:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
引用回帖:
2楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-09-19 22:54:31:
经常遇到的啊，可能是蛋白浓度太高了，你可以尝试大剂量稀释后在透析。也可能是你透析的buffer变换的太剧烈了，你可以先透析到lysis buffer在透析到你的buffer中，应该不会有沉淀的，我尝试过。

谢谢~我使用lysis buffer透析的（但没咪唑）~请问我离心后的沉淀就是我要的蛋白吗？那是不是已经变性了？
赞一下 回复此楼
仕不可不弘毅，任重而道远
3楼2011-09-19 23:11:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 墨香若水 at 2011-09-19 23:11:25:
谢谢~我使用lysis buffer透析的（但没咪唑）~请问我离心后的沉淀就是我要的蛋白吗？那是不是已经变性了？

沉淀的是变性的蛋白，不能用的，有活性的蛋白还在上清中
赞一下 回复此楼
4楼2011-09-19 23:15:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
引用回帖:
4楼: Originally posted by 临风7071 at 2011-09-19 23:15:04:
沉淀的是变性的蛋白，不能用的，有活性的蛋白还在上清中

不会吧，好多啊，一大坨~我的蛋白啊
赞一下 回复此楼
仕不可不弘毅，任重而道远
5楼2011-09-19 23:33:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evan1987

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
墨香若水(金币+6): 牛人~ 2011-09-20 00:05:15
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-09-20 12:24:53
，一看就是大肠杆菌表达的哇，降低点蛋白浓度透析。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-09-19 23:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-09-20 12:25:05
大肠杆菌表达后成包涵体，然后用6-8M尿素溶解，透析的时候透析液中不含尿素，如果是这样的情况，那请查阅旧帖，问题早已解决。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-09-20 00:03:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhczj

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与，欢迎常来 2011-09-21 10:11:01
如果目的是想把咪唑去除的话也可以采用G-25层析的方法，因为时间要比透析短，故如果沉淀的话可以很快的看到结果，且操作方便，条件温和，个人感觉透析时间长，发生意外的机会较大，比如透析袋没夹紧，有时还会破裂
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

墨香若水
9楼2011-09-21 08:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨香若水

木虫 (著名写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by bioartist at 2011-09-20 20:00:06:
我也经常遇到这个问题，对于以上位的建议，有疑义。
    透析后，蛋白溶液出现沉淀，都是析出的蛋白质形成的。这主要是由于目的蛋白在纯化是盐离子高，因此，蛋白的溶解度也高，当透析后，咪唑浓度降低，盐离子也 ...

10楼2011-09-21 09:10:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 墨香若水 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭