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jimmychen

金虫 (小有名气)

[求助] 重金求助关于离子交换树脂层析柱分离中性多糖的操作,先行谢谢各位

小弟最近在做一个活性物质分离纯化,发酵一种真菌,上清液中含有活性物质,是一中性多糖,想通过离子交换树脂法来进一步除杂,因第一次研究,望有经验的师兄师姐们帮帮忙。。。谢谢非常
      查阅的关于离子交换树脂的文献,知道硼酸与多糖产生反应形成有阴离子的复合物,因而用阴离子交换树脂,现在小弟有以下几个问题:
       1.阴离子交换树脂我应该选哪种类型,应该选什么样的柱子,树脂量一般是多少?
       2.进样前,样品怎样处理,进样时应保持怎样的浓度,也即是稀释到几十毫升还是保持浓缩后的几毫升进样?
       3.硼酸与中性多糖反应是在样品进样前放在一起处理,还是用硼酸处理柱子中的阴离子交换树脂?
       4.我查过一篇文献,讲的是进过样后用分别用水,0.05 M硼酸溶液、0.08 M硼酸溶液和0.5 M NaOH溶液洗脱。。。。。要是用硼酸处理柱子树脂,应该用多少浓度的硼酸啊。。。NaOH溶液是起柱子再生作用吗?
       5.带有硼酸和中性多糖的流分怎么进行检测和分离开啊


      问题比较多, 先在此谢谢
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trying,trying,trying
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jimmychen

金虫 (小有名气)

有没有知道的,拜托了。。。
trying,trying,trying
2楼2011-09-09 22:09:12
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会思想的芦苇

金虫 (正式写手)

你不应该发在这里  去生物科学版面发吧  那里有纯化人才
3楼2011-09-09 23:00:43
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荷塘爬虫

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

jimmychen(金币+30): 谢谢 2011-09-10 23:43:14
1、选哪种类型的树脂要通过实验筛选,柱子的大小与树脂装量由发酵液的处理量决定,一般一个批次的发酵液要一次处理清楚
2、浓缩液进样
3、.硼酸与中性多糖反应是在样品进样前放在一起处理
4、硼酸是解析液,NaOH溶液是起柱子再生作用
4楼2011-09-10 07:06:21
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jimmychen

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 荷塘爬虫 at 2011-09-10 07:06:21:
1、选哪种类型的树脂要通过实验筛选,柱子的大小与树脂装量由发酵液的处理量决定,一般一个批次的发酵液要一次处理清楚
2、浓缩液进样
3、.硼酸与中性多糖反应是在样品进样前放在一起处理
4、硼酸是解析液,Na ...

那如题用的是0.05 M硼酸溶液、0.08 M硼酸溶液洗脱,那用的样品硼酸处理液是不是浓度比0.05 M小的硼酸溶液平衡处理啊。。。还有一般硼酸溶液用多少浓度处理啊,对于小柱子样品进样多少效果好啊。。。
还有就是用硼酸处理了样品,是不是柱子不用硼酸处理了,用水洗至平衡,然后进硼酸处理过的样品啊。。。。。。麻烦了,谢谢
trying,trying,trying
5楼2011-09-10 23:10:49
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荷塘爬虫

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

jimmychen(金币+10): 谢谢,以后再向你请教 2011-09-11 18:02:28
引用回帖:
5楼: Originally posted by jimmychen at 2011-09-10 23:10:49:
那如题用的是0.05 M硼酸溶液、0.08 M硼酸溶液洗脱,那用的样品硼酸处理液是不是浓度比0.05 M小的硼酸溶液平衡处理啊。。。还有一般硼酸溶液用多少浓度处理啊,对于小柱子样品进样多少效果好啊。。。
还有就是用 ...

处理样品的硼酸浓度不一定比0.05小,因为硼酸还要与样品反应,但上柱的溶液一定小于0.05.还有......正确
6楼2011-09-11 06:29:15
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chinanhui

捐助贵宾 (著名写手)

小木虫超级终身版主


祝福一下!
7楼2011-09-11 06:56:09
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国际会议主席

捐助贵宾 (著名写手)

神马都是浮云

祝福一下!
8楼2011-09-11 07:04:09
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祝福 ~~祝福
9楼2011-09-11 07:45:02
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hezhao999

木虫 (正式写手)

1.阴离子交换树脂我应该选哪种类型,应该选什么样的柱子,树脂量一般是多少?—— 一般用DEAE基团的,我们用GE的DEAE-sepharose 6 F.F. ,树脂用量跟样品量有关
2.进样前,样品怎样处理,进样时应保持怎样的浓度,也即是稀释到几十毫升还是保持浓缩后的几毫升进样——— 进样量还是几毫升为好。
3. 硼酸溶液没用过,不清楚
10楼2011-09-13 10:43:49
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